蛋白质和变性蛋白质二级结构的FTIR分析进展

第２４卷第８期　２０１２年８月　化学研究与应用　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｖｏ１．２４，Ｎｏ．８　Ａｕｇ．，２０１２　文章编号：１００４—１６５６（２０１２）０８－１１７６－０８　蛋白质和变性蛋白质二级结构的ＦＴＩＲ分析进展　何建川ｈ，邵　阳２，张　波　（１．ｉｌｌ：Ｉｔ医学院基础医学院，四川南充６３７０００；　２．Ｊｌｌ￣Ｉｔ医学院医学影像研究所，四川南充６３７０００）　摘要：蛋白质结构的研究一直是人们研究的一个热点，蛋白质在发生变性后，二级结构会改变，从而导致生物　活性丧失，这些与医药学及食品科学等领域密切相关。傅里叶变换红外光谱（ｒａｔａ）作为一种无损、快速的分　析方法在蛋白质二级结构的研究中发挥重要的作用，本文就ＦＴＩＲ对于蛋白质二级结构的研究作一初步概　述，主要介绍ＦｒＩＲ研究蛋白质结构的主要方法、红外光谱的谱学特点。　关键词：蛋白质；二级结构；ＦＴＩＲ；进展　中图分类号：０６５７．３３　文献标识码：Ａ　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｄｅｎａｔｕｒｉｚｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｙ　ＦＴＩＲ　ＨＥ　Ｊｉａｎ．ｅｈｕａｎｈＳＨＡＯ　Ｙａｎｇ　，ＺＨＡＮＧ　Ｂｏ　，（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｂａｓｉｃ　Ｍｅｃｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｍｅｄｉｃｌａ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｎａｎｃｈｏｎｇ　６３７０００，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｍｅｄｉｃｌａ　Ｉｍａｇｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｎｏａｈ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｎａｎｃｈｏｎｇ　６３７０００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｓ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｈｏｔｓｐｏｔｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｗｉｌｌ　ｍａｋｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｗｉｔｈ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｅｎａｔ—　ｕｒａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈ　ｌｅａｄｓ　ｔｏ　ｌｏｓｉｎｇ　ｏｆ　ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｆｏｕｒｉｅｒ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍ　ｉｎｆｒａｒｅｄ　ｓｐｅｃｔｏｓｃｏｐｙ（ｒｒｍ）ｈａｓｒ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｉｎ　ｒｅ—　ｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｕｅ　ｔｏ　ｉｔｓ　ｓｕｐｅｒｉｏｔｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｐａｐｅｒ　ｒｅｖｉｅｗｓ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｏｆ　Ｓｔｕｄｙ　ｉｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｄｅｎａｔｕｒｉｚｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｙ　ｎ１Ｒ　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐｒｏｔｅｉｎ；ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ；ＦＴ［Ｒ；ｐｒｏｇｒｅｓｓ　蛋自质是由不同氨基酸以肽键相连所组成的　级结构和四级结构等几个层次。蛋白质的二级结　具有一定空间结构的生物大分子物质。蛋白质约　占人体重量的１６．３％，是生命的物质基础，没有蛋　白质就没有生命。因此，蛋白质是与生命及与各　种形式的生命活动紧密联系在一起的物质，机体　中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质　的参与。蛋白质是以氨基酸为基本单位构成的生　物大分子，其结构可分为一级结构、二级结构、三　构指的是蛋白质分子局部区域内，多肽链沿一定　方向盘绕和折叠的方式，主要是由分子内的氢键　维系的局部空间排列，包括　螺旋、　折叠、转角、　无规卷曲等。　蛋白质变性是指蛋白质在某些物理和化学因　素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其　理化性质的改变和生物活性的丧失的现象，其实　收稿日期：２０１ｌ－０９－０６；修回日期：２０１１－１２－２３　基金项目：中央财政支持地方高校发展专项资金资助　联系人简介：何建川（１９７９・），男，讲师，主要从事光谱分析研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ａｔｐｈｊｃ７９１２＠１６３．ｃｏｍ　第８期　何建川等：蛋白质和变性蛋白质二级结构的　Ｒ分析进展　ｌ１７７　质是蛋白质结构中的次级键被外界因素所破坏，　变性后蛋白质的二级结构会发生变化。使蛋白质　变性的因素主要可分为两大类，化学因素和物理　因素。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强　碱、重金属盐等；能使蛋白质变性的物理方法有加　热（高温）、紫外线及ｘ射线照射、超声波、剧烈振　荡或搅拌等。常见的用于蛋白质二级结构及变性　蛋白质二级结构分析的方法有ｘ射线衍射法、圆　二色谱法（ＣＤ法）、荧光光谱法及傅里叶变换红外　附近有３个吸收峰，转角结构的红外吸收位于　１６６５ｃｍ　附近和１６８５ｅｍ　附近，而１６１２ｃｍ　附近　的吸收峰则应归属于蛋白质和多肽侧链的吸收。　张超　等则是将冻干的冬小麦麸皮抗冻蛋白的样　品经Ｐ：Ｏ　干燥后与ＫＢｒ混合压片然后测定其红　外光谱，得到的谱图经过平滑处理，然后采用　Ｇａｕｓｓ峰形拟合，最后再根据各子峰与各个二级结　构的积分面积来计算各种二级结构的百分含量。　综合分析后的结果表明抗冻蛋白的二级结构组成　光谱法（ｒｒｉＲ）等，其中，ＦＨＲ法具有宏观整体鉴　定复杂体系的优点及元损快速的特点，因而，在蛋　白质二级结构的分析中具有越来越广泛的应用。　傅里叶变换红外光谱法应用于蛋白质结构的　分析已有六十多年的历史，早在１９５０年，Ｅｌｌｉｏｔｔ和　Ａｍｂｒｏｓｅ等人就根据模型多肽的结果提出了红外　酰胺Ｉ带１６５０～１６６０ｅｍ　的峰归属于Ｏｔ．螺旋结　构，１６３０～１６４０ｃｍ　的峰归属于ｐ一折叠的假设，这　一阶段的研究属于对蛋白质结构的定性分析；到　了１９８３年，Ｓｕｓｉ和Ｂｙｌｅｒ等人将二阶导数理论应　用于蛋白质二级结构的研究当中，１９８６年，他们又　将卷积方法应用于二级结构分析。二阶导数和去　卷积技术能够把原来蛋白质红外光谱的酰胺Ｉ带　中未能分辨的峰进一步分解为若干子峰，并能够　指出各个子峰的峰位，再结合曲线拟合的方法，从　而可以实现对蛋白质各二级结构的定量化分析。　在接下来的二十多年里，随着傅里叶红外光谱仪　及其联用技术的发展特别是计算机辅助解析技术　的重大突破，应用傅里叶变换红外光谱仪研究蛋　白质的二级结构取得了很大的发展。　１　Ｆ１１Ｒ应用于蛋白质二级结构的分析　ＦＨＲ用于蛋白质二级结构的分析通常是采用　蛋白质直接与ＫＢｒ压片或是溶解于水或重水形成　溶液，或是再经冰冻干燥后与ＫＢｒ压片的方法来　扫描图谱　。］。在谱图解析的过程中，二阶导数　法、去卷积及最小二乘法等技术起到了重要的作　用。如王箐舟等¨　将注射用人免疫球蛋白先冻　干，然后溶于重水中，然后再冻干，冻千后的样品　用重水配制成一定质量分数的溶液装人ＣａＦ　池　中进行红外分析，结果显示人免疫球蛋白的　－甥；　旋结构的红外光谱吸收峰位位于１６５０～１６６０ｃｍ　范围，Ｂ．折叠在１６２３～１６３９　ｃｍ’。范围和１６７５ｅｍ　为：仅一ｈｅｌｉｘ为１５．０５％一ｌ５．８７％，Ｂ－ｓｈｅｅｔ为　３６．００％～３６．９２％，１３－ｔｕｒｎ为１７．３１％一１７．７５％，　而ｒａｎｄｏｍ　ｃｏｉｌ为３０．３ｌ％一３０．８２％。　２　ＦＴＩＲ应用于变性蛋白质二级结构　的分析　２．１热变性蛋白质的ＦＨＲ研究进展　温度升高是导致蛋白质变性的最为常见的因　素之一，有关这方面的研究也是进行得较为广泛　和深入　引，因而将其单独讨论。如卞为东等　利　用ＦＴＩＲ研究了天花粉蛋白的热去折叠过程，结果　表明天花粉蛋白的二级结构在２５～５５ｃ【＝范围基本　保持不变；而在５５—６０℃，几乎所有的二级结构都　发生了较大的变化；温度达到６５￣Ｃ或以上时，总的　１３折叠含量达到５６％，且不再随温度而变化，达到　了热去折叠的终态。而袁波等人【５　更是采用精度　可达到０．２℃的循环水控制温度，每隔２￣Ｃ为一测　定单元分析了加热导致的牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的　二级结构的变化，结果显示，加热到７０￣Ｃ前，ＢＳＡ　的二级结构以仅一螺旋为主；加热到７０￣Ｃ之后，由　于加热导致了Ｏｔ．螺旋减少和Ｂ一片层增加的协同变　化，这种协同变化发生在６８～８２℃这样一个温度　范围；同时１６４５　ｃｍ　的新的吸收峰的形成表明　ＢＳＡ在高温下形成了无规卷曲。钟朝辉等　在　２０、３５、６０、９０、１１０ｏＣ等几个温度点用ｂ３３Ｒ扫描了　与ＫＢｒ混合压片的鱼鳞胶原蛋白冻千品，结果表　明位于１６５８ｃｍ　的鱼鳞胶原蛋白的酰胺１带在温　度升至６０℃时，峰形发生明显改变，主峰裂分为多　个吸收峰，１６５１ｔｉｌｌ一处对应的Ｏｔ－螺旋结构减少，　１６４３ｃｍ　处对应的无规结构出现，１６６８、１６６２、　１６８９ｃｍ　。　处对应的转角和１６５７、１６８０和１６７２ｃｍ　处对应的折叠结构增加，表明温度升高使维系胶　原蛋白螺旋结构的氢键被破坏，发生解螺旋化，螺　１１７８　化学研究与应用　第２４卷　旋结构向无规、转角和折叠等其他的二级结构转　变。　２．２化学变性蛋白质的ＦＴＩＲ研究进展　化学因素是导致蛋白质变性的重要因素之　一，在强酸、强碱、重金属盐、醇、尿素等化学试剂　的作用下，维系蛋白质二级结构的主要作用力氢　键会遭到不同程度的破坏，从而导致蛋白质变　性¨们。在考察药物体内作用、环境科学的研究等　方面经常需要考虑到人体内蛋白质的化学变性。　如马萍等¨¨利用丌１Ｒ对骨螺紫及其铜配合物与　人血清白蛋白的相互作用进行了研究，先将得到　的红外谱图进行差减，再在１６００—１７００ｃｍ　范围　进行两点基线校正，进行平滑处理后，再进行二阶　导数和去卷积，从而可估算出各子峰的峰位和半　峰宽，手动选定峰位和峰宽，再采用Ｇａｕｓｓｅ函数拟　合，最后可将重叠的谱带分辨开来，从而可根据其　积分面积计算各种二级结构的相对百分含量。结　果显示，骨螺紫是破坏人血清白蛋白二级结构的　主要因素，通过与人血清白蛋白的结合能使蛋白　质分子中的肽链部分展开，二级结构从仅一螺旋和　ｐ　折叠向Ｂ　转角和无规卷曲结构转变，且分子结　构的松散程度增加。而张丽等¨　则考虑到铅作为　全球范围内最具危害性的重金属元素之一，从而　开展了Ｐｂｎ与牛血清白蛋白复合体系的蛋白质二　级结构的研究，利用二阶导数、去卷积和谱线拟合　技术对蛋白质红外光谱图的酰胺Ｉ带进行处理以　推测蛋白质二级结构的变化，结果表明，与Ｐｂ　发　生相互作用后，牛血清白蛋白中的　一螺旋结构减　少了约８个百分点，Ｂ一折叠结构减少了约３个百　分点，Ｂ－转角则增加了约十一个百分点，无规卷曲　基本保持不变。且随着体系中Ｐｂ　浓度增大，仅．　螺旋和Ｂ－折叠结构向１３一转角结构发生转化的这种　趋势有所增强。　２．３物理变性蛋白质的ＦＴＩＲ研究进展　物理方法使蛋白质变性的种类很多，包括高　压、紫外线或ｘ光照射、超声波、剧烈的机械振荡　等，有关物理因素导致蛋白质变性也是目前光谱　研究的热点之一『】　。如唐传核等¨　就分别在　压力２００、４００及６００ＭＰａ时研究了冻干大豆分离　蛋白构象的变化，结果显示，压力为２００ＭＰａ的ＨＰ　处理致使大豆分离蛋白的酰胺ｌ带的峰发生显著　红移，峰的强度也显著增加，这表明经２００ＭＰａ处　理的蛋白的构象变得舒展；而压力为４００ＭＰａ的　ＨＰ处理未导致酰胺Ｉ带的峰发生明显的变化；而　经６００ＭＰａＨＰ处理后，位于１６９２、１６６８和　１６６０ｃｍ　的峰强度明显增加，这在一定程度上证　实了在ＨＰ处理下结构展开的蛋白质经历了二级　结构的“重构过程”。而刘斌等¨副则是研究了超　声对ＢＳＡ二级结构的影响，分别在功率０，２００，　５００，６００，８００，９００，１０００和１５００Ｗ下处理样品，研　究超声功率对结构的影响，同时，在６００Ｗ的功率　下分别处理样品０，１０，１５，２０和３０ｍｉｎ，研究超声　时间对ＢＳＡ结构的影响，结果表明，经过超声处理　后，　－螺旋、无规卷曲含量在所采用的超声功率下　普遍降低，ｐ一转角及ｐ一折叠含量明显增加，初步可　以认为超声具有使得　一螺旋和无规卷曲向Ｂ一转角　及Ｂ．折叠结构转化的趋势；同时，根据超声时间对　ＢＳＡ二级结构影响的研究发现，超声１０ｍｉｎ后，各　二级结构的含量趋于稳定，达到一定的值，即超声　对于ＢＳＡ二级结构的影响主要是在前１０ｍｉｎ的时　间。　２．４病变组织蛋白质二级结构的ＦＴＩＲ研究进展　人体组织发生病变后，体内的蛋白质结构和　水平也会发生一定的变化，尤其是癌变组织中，蛋　白质的二级结构会发生明显的变化（１８－２４］。如赵瑾　等¨副利用阳Ｒ研究了良性和恶性乳腺组织，使　用ＡＴＲ探头对手术离体乳腺组织接触并扫描，从　而获取癌变组织的红外谱图，根据谱图中代表蛋　白质酰胺Ｉ带的１６４０ｃｍ　的峰和代表蛋白质酰胺　ＩＩ带的１５５０ｃｍ　的峰发生了红移以及乳腺癌组织　的半高宽值增大的谱图解析结果表明，癌组织中　仪一螺旋的含量大大增加，而Ｂ一折叠的含量则大大　降低，无规卷曲和转角结构的含量变化不大。姚　宏伟等¨　同样采用　ＩＲ．ＡＴＲ探头扫描了手术切　除的大肠癌样本，结果显示，代表蛋白质的峰的吸　收强度显著升高，表明癌组织中蛋白质的含量相　对升高，猜测可能是恶性肿瘤组织中合成代谢更　加活跃而致。除癌症外，其他病变组织中，蛋白质　二级结构也有较为明显的改变，如彭立新等　应　用ｍＲ－ＨＡＴＲ研究了正常人与ｔ３一重型地中海贫　血症患者的血红蛋白及红细胞内含物，通过对相　对强度方法的改进，可以从整体上观察到蛋白质　在地中海贫血中的组成及结构差异：与正常组相　比，地中海贫血组在表征蛋白质二级结构的１６５２、　１６３８ｃｍ　附近的吸收峰明显下降。　第８期　何建川等：蛋白质和变性蛋白质二级结构的ｂ－３＂ＩＲ分析进展　１１７９　３　研究展望　综上所述，ｂ￣＇ＩＲ用于蛋白质二级结构研究的　分析方法通常是对蛋白质的溶液或对冻干的蛋白　质直接进行扫描，以取得相应的红外光谱谱图，在　此过程中，蛋白质可以根据研究的需要进行物理　或化学变性处理。对蛋白质溶液的红外扫描可较　好的保持蛋白质的二级结构，但是有一定的干扰　吸收；若采用ＫＢｒ压片法制备红外标本，则可能会　破坏蛋白质的二级结构，目前对蛋白质二级结构　的研究大多还是利用ＫＢｒ压片法来进行。　利用ＦｒＩＲ研究变性蛋白质的二级结构取得　了一些共识，各类蛋白质在发生变性后，二级结构　中的仅－螺旋有向Ｂ结构（ｐ一转角及ｐ．折叠）转化　的趋势，而无规卷曲也会发生一定的变化。这些　研究表明，ＦＴＩＲ作为一种快速、无损的检测方法能　参考文献：　［１］王箐舟，程雅琴，沈世杰，等．静脉注射用人免疫球蛋白　二级结构分析与生物学活性间的关系［Ｊ］．中国生化药　物杂志，２００６，２７（２）：９９－１０１．　［２］张超，张晖，赵晓燕，等．使用圆二色性光谱和红外光谱　研究冬小麦麸皮抗冻蛋白的二级结构［Ｊ］．光谱学与光　谱分析，２００９，２９（７）：１７６４—１７６７．　［３］Ｙｉｎ　Ｙ，Ｂｅｒｇｌｕｎｄ　Ｌ，Ｓａｌｍ６ｎ　Ｌ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｔｅａｍ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｗｏｏｄ　ｃｅｌｌ　ｗａｌｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．　２０１１，１２（１）：１９４－２０２．　［４］卞为东，孙素琴，黄岳顺，等．ＦＴＩＲ光谱法研究天花粉　蛋白的热去折叠过程［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２０００，２０　（４）：４７１－４７３．　［５］袁波，严惠民．利用红外光谱和窗口因子分析研究加热　导致的牛血清白蛋白的二级结构变化［Ｊ］．高等学校化　学学报，２００７，２８（１２）：２２５５－２２５８．　［６］钟朝辉，李春美，顾海峰，等．温度对鱼鳞胶原蛋白二级　结构的影响［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２００７，２７（１０）：　１９７０一ｌ９７６．　［７］Ｍａｈｅｓｅｎ　Ｍ　Ｊ，Ｂｊｅｒｒｅｇａａｒｄ　Ｓ，Ｈｏｖｇａａｒｄ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｍｕｈｉｖａｒｉ－　ａｔｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌ　ｉｎ　ｆｒｅｅｚｅ・ｄｒｉｅｄ　ａｎｄ　ｓｐｒａｙ—ｄｒｉｅｄ　ｉｎｓｕ。　ｌｉｎ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ　ｂｙ　ＮＩＲ　ａｎｄ　ＩＲ［Ｊ］．ＡＡＰＳ　Ｐｈａｒｍ　Ｓｃｉ　ｃｈ，２０１１，１２（２）：６２７－６３６．　［８］Ｐａｏｌｏｒｏｓｓｉ　Ｍ，Ｍｏｎｔｉｃｈ　Ｇ　Ｇ．Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　１３２一　ｈｕｍａｎ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｉ　ａｎｄ　ｌｉｐｉｄ　ｏｒｄｅｒ　ｉｎ　ｌｉｐｉｄ—ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｒｎ—　ｐｌｅｘｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ，２０１１，１８０８（９）：２１６７’　２】７７．　够较好的用于蛋白质及变性蛋白质的二级结构的　研究。　ｂ－ＴＩＲ用于蛋白质结构的研究也还存在一些局　限，由于蛋白质的结构十分复杂，尤其是在人体内　蛋白质受各种化学、生物因素的影响较大，结构更　加复杂，而红外光谱在扫描获取图谱时受外界因　素的影响，故而在用ＦＴＩＲ对样品进行扫描时获取　的图谱难以实现高度的重复性；同时，在对蛋白质　酰胺Ｉ带的子峰的准确归属上还未达到完全的一　致，这些，都有待于进一步的研究和探讨。　利用ＦＴＩＲ对蛋白质结构的研究目前还远未　达到成熟，也没有实现广泛的应用，随着ＦＦＩＲ联　用技术及ＡＴＲ探头等技术的应用，ＶＩ＇ＩＲ在分析蛋　白质结构上的应用有望从目前的组织水平向细胞　水平深入　ｊ，也可以由离体分析蛋白质向在体分　析蛋白质　的方向努力，而这样的应用无疑对化　学还是医学领域而言都具有重大的意义。　［９］Ｓａｓｓｉ　Ｐ，Ｇｉｕｇｌｉａｒｅｌｌｉ　Ａ，Ｐａｏｌａｎｔｏｎｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ　ａｎｄ　ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｙｓｏｚｙｍｅ：ａ　ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ　ａｎｄ　ｋｉｎｅｔｉｃ　ｓｔｕｄｙ　ｂｙ　ＦＴＩＲ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ［Ｊ］．Ｂｉｏｐｈｙ，Ｃｈｅｍ，２０１１，１５８　（１）：４６＿５３．　［１Ｏ］Ｉｔｋｉｎ　Ａ，Ｄｕｐｒｅｓ　Ｖ，Ｄｕｆｒｇｎｅ　Ｙ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｃａｌｃｉｕｍ　ｉｏｎｓ　ｐｒｏ－　ｍｏｔｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｍｙｌｏｉｄ　Ｂ—ｐｅｐｔｉｄｅ（１－４０）ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ　ｃａｕｓａｌｌｙ　ｉｍｐｌｉｃａｔｅｄ　ｉｎ　ｎｅｕｒｏｎａｌ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ　。　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ．２０１１，６（３）：ｅ１８２５０．　［１１］马萍，迟燕华，庄稼，等．骨螺紫及其铜配合物与人血　清白蛋白相互作用的光谱学研究［Ｊ］．高等学校化学　学报，２００９，３０（８）：１５０９—１５１５．　［１２］张丽，秦德志，杨维春，等．Ｐｂ“一牛血清白蛋白复合体　系中蛋白质二级结构的研究［Ｊ］．分析测试学报，　２０１０，２９（７）：７２１－７２５．　［１３］唐传核，马正勇．采用￣３＂ＩＲ技术研究高压处理对冻干　大豆分离蛋白构象的影响［Ｊ］．光谱学与光谱分析，　２００９，２９（５）：１２３７—１２４０．　［１４］“Ｘｕ，Ｘｕ　Ｙｕａｎ，Ｈｅ　Ｂｉｎ．Ｍａｇｎｅｔｏａｃｏｕｓｔｉｃ　ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ　ｗｉｔｈ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ　ｉｍｐｅｄａｎｃｅ　ｏｆ　ｂｉｏｌｏｇｉｃｌａ　ｔｉｓｓｕｅ　Ｊ］．Ｊ　Ａｐｐｌ户　，２００６，９９：０６６１　１２．　［１５］Ｘｉａ　Ｒｏｎｇｍｉｎｍ，Ｌｉ　Ｘｕ，ｔｔｅ　Ｂｉｎ．Ｍａｇｎｅｔｏａｃｏｕｓｔｉｃ　ｔｏｍｏ・　ｇｒａｐｈｉｃ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｏｆ　ｅｌｅｃｔｉｒｃａｌ　ｉｍｐｅｄａｎｃｅ　ｗｉｔｈ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｉｎ。　ｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｐｈｙｓｉｃｓ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００７，９１：０８３９０３．　［１６］刘斌，马海乐，李树君，等．应用ＦＴＩＲ研究超声对牛血　清白蛋８－－级结构的影响［Ｊ］．光谱学与光谱分析，　２０１０，３０（８）：２０７２－２０７６．　１１８０　化学研究与应用　第２４卷　［１　７］Ｍａｇａｚｕ　Ｓ，Ｃａｌａｂｒｏ　Ｅ．Ｓｔｕｄｙｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｌｅｃｔｒｏｍａｇｎｅｔｉｃ－ｉｎ・　ｄｕｃｅｄ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ　ｏｆ　ｔｒｅｈａｌｏｓｅ　ｂｙ　Ｆｏｕｒｉｅｒ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍ　ｉｎｆｒａｒｅｄ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｐｈｙｓ　Ｃｈｅｍ　Ｂ，２０１１，１１５（２１）：６８１８－６８２６．　［１８］赵瑾，刘亚奇，徐怡庄，等．傅里叶变换红外光谱鉴别　正常和良恶性乳腺组织［Ｊ］．高等学校化学学报，　２０１　ｌ，３２（２）：２４６－２５１．　［１９］姚宏伟，刘亚奇，傅卫，等．红外光谱用于大肠肿瘤诊　断的初步研究［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２０１１，３１（２）：　２９７－３Ｏ１．　［２０］Ｙａｎｇ　Ｔ　Ｔ，Ｗｅｎｇ　Ｓ　Ｆ，Ｚｈｅｎｇ　Ｎ，ｅｔ　１ａ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ　ｍａｐ・　ｐｉｎｇ　ｏｆ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｆｎａｒｃｔｉｏｎ　ｂｙ　Ｆｏｕｒｉｅｒ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍ　ｉｎｆｒａｒｅｄ　ｓｅｐｃｔｒａｌ　ｉｍａｇｉｎｇ［Ｊ］．Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｓｃｉ　ｌｎｔ，２０１１，２０７（１－３）：ｅ３４－３９．　［２１］Ｐｅｒｅｖｅｄｅｎｔｓｅｖａ　Ｅ，Ｃａｉ　Ｐ　Ｊ，Ｃｈｉｕ　Ｙ　ｃ，ｅｔ　１ａ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｌｙｓｏ￣ｒｍｅ　ａｎｄ　ｎａｎｏｄｉａｍｏｎｄ　ｃｏｍ－　ｐｌｅｘ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｆｏｒ　ｂｉｏ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｌａｎｇｍｕｉｒ，２０１ｌ，　２７（３）：１０８５—１０９１．　［２２］尹刚，徐智，徐怡庄，等．胆管癌新鲜离体组织的傅里　叶变换红外光谱研究［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２００９，　２９（１２）：３２４１－３２４５．　［２３］孙启刚，刘亚奇，徐怡庄，等．胆囊癌的傅里叶变换红　外光谱研究［Ｊ］．光谱学与光谱分析，２０１０，３０（１２）：　３１９５－３１９８．　［２４］何建川，王建华，邵阳．￣３＂ＩＲ应用于经染色处理的妇　科肿瘤组织切片的研究［Ｊ］．光谱实验室，２０１１，２８　（１）：３４４＿３４７．　［２５］彭立新，王桂文，姚辉璐，等．傅里叶变换红外光谱诊　断地中海贫血症［Ｊ１．分析化学，２００８，３６（１０）：１３６９．　１３７４．　［２６］Ｌａｃａｙｏ　Ｃ　Ｉ，Ｍａｌｋｉｎ　Ａ　Ｊ，Ｈｏｌｍａｎ　Ｈ　Ｙ，ｅｔ　１ａ．Ｉｍａｇｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ｗａｌｌ　ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ　ｉｎ　ｓｉｎｇｌｅ　Ｚｉｎｎｉａ　ｅｌｅｇａｎｓ　ｔｒａｃｈｅａｒｙ　ｅｌｅ—　ｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１０，１５４（１）：１２１．１３３．　［２７］Ｌｉａｏ　Ｃ，Ｐｉｅｒｃｅｙ—Ｎｏｒｍｏｒｅ　Ｍ　Ｄ，Ｓｏｒｅｎｓｅｎ　Ｊ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｆｏ　ｕｓｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　Ｃｌａｄｏｎｉａ　ｓｐｐ．ｂｙ　ｖｉｂｒａ－　ｔｉｏｎａｌ　ｓｅｐｃｔｒｏｓｃｏｐｙ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｓｔ，２０１０，１３５（１２）：３２４２－　３２４８．　（责任编辑李方）