绿茶多酚对脑缺血大鼠血脑屏障及学习记忆功能的影响

第２１卷第３期　２０１２年６月　中国组织化学与细胞　化学杂志　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪｏＵＲＮＡＬ　０Ｆ　Ｙ　ＡＮＤ　ＣＹＴ０ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　Ｖｏ１．２１．ＮＯ．３　Ｊｕｎｅ．２０１２　绿茶多酚对脑缺血大鼠血脑屏障及学习记忆功能的影响　詹周伟　徐剑文　谢美容　郑姬彦　康伦雅　张默晴　吴李花　（福建医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系，福建福州３５Ｏ１０８）　［摘要］　目的研究绿茶多酚（Ｇｒｅｅｎ　ｔｅａ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ，ＧＴＰｓ）对脑缺血大鼠血脑屏障（Ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ，ＢＢＢ）及学习　记忆功能的影响。方法　双侧颈总动脉结扎法制备脑缺血大鼠模型，大鼠随机分为假手术组、模型组和ＧＴＰｓ治疗组，每组８　只，观察ＧＴＰｓ的保护作用。应用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫测试大鼠学习记忆能力，甲苯胺蓝染色法观察大鼠海马ＣＡ１区神经元形态　变化，透射电镜观察ＢＢＢ的变化以及海马ＣＡ１区神经元超微结构改变。结果模型组与假手术组相比ＢＢＢ破坏，海马ＣＡ１　区结构紊乱，学习记忆能力明显下降（Ｐ＜０．０５），ＧＴＰｓ治疗组与模型组相比，缺血性脑损伤明显减轻，学习记忆能力明显改善　（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论ＧＴＰｓ能够减轻缺血性脑损伤，从而发挥改善脑缺血ＳＤ大鼠学习记忆能力的作用。　（关键词］脑缺血；　ＧＴＰｓ；　Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫；　电镜；　ＢＢＢ　甲苯胺蓝染色；海马结构；　氧化应激　［中图分类号）　Ｒ３２２．８１１　（文献标识码］　Ａ　Ｄ０Ｉ：１０．３８７０／ｚｇｚｚｈｘ．２０１２．０３．０１２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｇｒｅｅｎ　ｔｅａ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｏｎ　ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ　ａｎｄ　ｌｅａｒｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｍｅｍｏｒｙ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｔａ　Ｚｈａｎ　Ｚｈｏｕｗｅｉ，Ｘｕ　Ｊｉａｎｗｅｎ　，Ｘｉｅ　Ｍｅｉｒｏｎｇ，Ｚｈｅｎｇ　Ｈｕａｙａｎ，Ｋａｎｇ　Ｌｕｎｙａ，Ｚｈａｎｇ　Ｍｏｑｉｎｇ，Ｗｕ　Ｌｉｈｕａ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　Ａｎａｔｏｍｙ　ａｎｄ　Ｈｉｓｔｏｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂａｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ　３５０１０８，Ｃｈｉｎａ）　（Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｇｒｅｅｎ　ｔｅａ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ（ＧＴＰｓ）ｏｎ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒ—　ｒｉｅｒ（ＢＢＢ）ａｎｄ　ｏｎ　ｌｅａｒｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｍｅｍｏｒｙ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｅｒｅｂ＇ｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｄｅ—　ｍｅｎｔｉａ　ｗａｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｐｅｒｍａｎｅｎｔ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｌａｔｅｒａｌ　ｃｏｍｍｏｎ　ｃａｒｏｔｉｄ　ａｒｔｅｒｉｅｓ　ｉｎ　ＳＤ　ｒａｔｓ．Ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　３　ｇｒｏｕｐｓ　ｏｆ　８　ｒａｔｓ　ｅａｃｈ：ｓｈａｍ～ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ＧＴＰｓ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＧＴＰｓ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｔｈｅ　ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｌｅａｒｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｍｅｍｏｒｙ　ｗａｓ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ　ｉｎ　Ｍｏｒｒｉｓ　ｗａｔｅｒ　ｍａｚｅ．Ｎｅｕｒｏｎ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＣＡ１　ａｒｅａ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ　ｂｌｕｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ；Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ＢＢＢ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｒａｎｓ～　ｍｉｓｓｉｏｎ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅ１　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｄｅｓｔｒｕｃｔｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）．ＧＴＰｓ　ｓｉｇ～　ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ａｌｌｅｖｉａｔｅｄ　ｈｙｐｏｘｉｃ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｄａｍａｇｅ，ａｎｄ　ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＧＴＰｓ　ｉｅｐｒｏｖｅ　ｔｒｈｅ　ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｌｅａｒｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｍｅｍｏｒｙ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ｂｙ　ｒｅｌｉｅｖｉｎｇ　ｈｙｐｏｘｉｃ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｄａｍａｇｅ．　（Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　Ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ；　ＧＴＰｓ；　Ｍｏｒｒｉｓ　ｗａｔｅｒ　ｍａｚｅ；　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ；　ＢＢＢ；　Ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ　ｂｌｕｅ　ｓｔａｉｎ；Ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ；　Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　脑缺血是在各种脑血管病的基础上出现，以认　知、记忆功能减退为主要表现，是神经内科的常见疾　病，其发病率随着人口老龄化的发展逐渐增高。研　究表明，氧自由基参与了脑缺血后脑组织的氧化损　伤Ⅲ，而维持中枢神经系统内环境稳定的ＢＢＢ结构　［收稿日期］２０１ｉ－１２—２５　［修回日期］２０１２—０４—２０　［基金项目］福建省青年人才基金项目（２００８Ｆ３０４８）；福建省　教育厅项目（ＪＡ０８１０８）；福建医科大学创新性实　验计划（Ｃ１０１２６）　的变化也是缺血性脑损伤病理变化的重要环节之　一＿２］，同时神经胶质细胞在发病过程中具有重要作　用ｌ３　］。脑细胞缺血缺氧后，氧自由基在细胞内大量　积累，导致神经元损伤进而导致功能障碍。研究发　现，ＧＴＰｓ有清除自由基及抗氧化作用［　，其作用强　于维生素Ｃ。本实验采用永久性结扎切断双侧颈总　动脉法建立脑缺血动物模型，研究ＧＴＰｓ对脑缺血　大鼠学习记忆能力的影响，探讨其在脑缺血中发挥　改善作用的可能机制，为其临床应用提供实验依据。　材料和方法　１．材料　［作者简介］詹周伟，男，（１９９０年），汉族，本硕连读生。　＊通讯作者（Ｔｏ　ｗｈｏｍ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ａｄｄｒｅｓｓｅｄ）　第３期　詹周伟等．绿茶多酚对脑缺血大鼠血脑屏障及学习记忆功能的影响　２６３　健康ｓＤ雌性大鼠２４只，体重（２５０±５Ｏ）ｇ，购　自吴氏实验动物中心。随机分为假手术组、模型组　和ＧＴＰｓ治疗组，每组８只。　２．方法　洗使肝脏变白，用３００ｍｌ　４％多聚甲醛ＰＢＳ溶液进　行固定，速度先快后慢，待四肢出现抽搐变硬现象后　完整地取下全脑，放入新鲜的４　多聚甲醛（０．１　ｍｏｌ／Ｌ　ＰＢＳ缓冲液配制）溶液中固定２４ｈ，依次梯度　乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋，连续冠状切片，　片厚约５ｕｒｎ，行甲苯胺蓝染色观察形态学变化。　２．５电镜样品制备及观察取假手术组、模型　组和ＧＴＰｓ治疗组大鼠各２只，用１Ｏ　水合氯醛腹　腔注射麻醉后，掀开颅盖，迅速向颅腔滴人４　多聚　甲醛＋３　戊二醛（Ｏ．１ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．４磷酸盐缓冲液　２．１动物模型制作　采用双侧颈总动脉永久结　扎切断法制备模型＿７］：将大鼠用１ｏ　９／６水合氯醛　（３００ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射，麻醉成功后仰卧固定在手术　台上，常规消毒，颈正中切口，分离双侧颈总动脉，４　号丝线双重结扎切断后，缝合切口，放回笼中饲养。　假手术组只分离不结扎颈总动脉，余操作过程相同。　２．２药物治疗　造模成功后ｌｈ，ＧＴＰｓ治疗组　腹腔给予ＧＴＰｓ（６０ｍｇ／ｋｇ），连续１４ｄ；假手术组和　模型组给予等量生理盐水腹腔注射，连续１４ｄ。假　手术组为正常对照。（ＧＴＰｓ购于福建日冕科技开　发有限公司，纯度＞９８　）。　配制）的固定液，立即取大鼠左侧海马ＣＡ１区（平外　侧膝状体水平）２ｒａｍ×２ｒａｍ×５ｍｍ脑块。－取材后　经３％戊二醛一１．５％多聚甲醛前固定（４℃），１％锇　酸一１．５　亚铁后固定１．５ｈ，ＰＢＳ漂洗，７Ｏ　酒精饱和醋酸铀染液块染，酒精一丙酮梯度脱水，环　氧树脂６１８包埋剂包埋。超薄切片８０ｎｍ，醋酸铀、　２．３　Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫测试　自建水迷宫为直　径１００ｃｍ、高４０ｃｍ的圆形水池，水深２５ｃｍ、水温保　持（２５４－１）℃，池中用豆浆粉泡成不透明的浑浊液，　水面均匀覆盖一层大小相似的细小塑料泡沫颗粒。　池壁上标有Ｎ、Ｅ、ｗ、Ｓ四个人水点，将水池平均分　为４个象限，在ＥＳ象限正中放一个直径为７ｃｍ、高　２３ｃｍ的有机玻璃站台，平台离水面２ｃｍ。训练期间　迷宫外参照物保持不变。实验前１ｄ适应水池环境。　（１）定位航行试验：实验历时５ｄ，自第１ｄ起每天于　固定时间开始训练一次，将大鼠面朝池壁，从Ｎ象　限开始依次放入水中，大鼠自入水起６０ｓ内爬上平　台的时间记为在该象限搜索平台的潜伏期；若６０ｓ　内没有爬上平台，就将其引上平台，潜伏期记为　柠檬酸铅各染色５ｍｉｎ；在飞利浦ＥＭ　２０８型透射电　镜下观察、摄影。　２．６统计学方法各组资料数据以均值±标准　差表示（　±５），使用ＳＰＳＳ１３．０统计软件对平均逃　避潜伏期以及每分钟穿越平台所在象限次数行单因　素方差分析后进行Ｄｕｎｎｅｔｔ—ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差　异有统计学意义。　结　果　１．行为变化　各组大鼠在双侧颈总动脉结扎切断后，活动能　６０ｓ。每个象限结束后，大鼠爬上或被引上平台，休　息３０ｓ后开始下一象限的训练，四个象限潜伏期的　平均值记为该次训练的逃避潜伏期。（２）空问探索　试验：在定位航行实验结束后当天，撤去平台，将大　鼠自任一象限随机放人池中，目测记录大鼠每分钟　穿越平台所在象限的次数。　２．４组织切片制备及甲苯胺蓝染色观　用水合　氯醛深度麻醉（３００ｍｇ／ｋｇ），开胸后在右心耳剪开一　个小口，进行主动脉插管，３０Ｏｒａｌ　０．９　生理盐水冲　力低下，自发运动减少，食欲不振，多数于２４　ｈ后恢　复正常。　２．Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫测试　２．１定向航行实验结果　大鼠在不同时间段的　平均逃避潜伏期比较从训练第２ｄ起ＧＴＰｓ治疗组　大鼠平均逃避潜伏期均较模型组明显缩短，两两比　较差异均有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５，表１）。　表１　ＧＴＰｓ对各组大鼠在不同时段平均逃避潜伏期（ｓ）的影响（　一８，ｚ４－ｓ）　Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＧＴＰｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｅｓｃａｐｅ　ｌａｔｅｎｃｙ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｔａｇｅｓ（ｎ＝８，　－ｓ）　＊，Ｐ＜Ｏ．０５ｖｓ假手术组（ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｈａｍ—ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ）；＃，Ｐ％Ｏ．ＯＢｖｓ模型组（ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ）；　△，Ｐ＞Ｏ．０５ｖｓ假手术组（ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｈａｍ—ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ）；　２６４　中国组织化学与细胞化学杂志　第２１卷　２．２空间探索实验结果　大鼠每分钟穿越平台　所在象限次数的比较与模型组相比，ＧＴＰｓ治疗组　大鼠每分钟穿越平台所在象限位置次数明显增多，　两两比较差异均有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５，表２）。　表２各组大鼠穿越平台所在象限次数（＆／ｍｉｎ）的比较（，ｚ一８，　±５）　Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｔｉｍｅｓ　ｃｒｏｓｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｌａｔｆｏｒｍ　ｑｕａｄｒａｎｔ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ（ｎ一８，　±　）　＊，Ｐ＜０．０５ｖｓ假手术组（ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｈａｍ—ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ）；＃，Ｐ＜０．０５ｖｓ模型组（ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ）；　３．大鼠海马ＣＡ１区甲苯胺蓝染色观察结果　（１）假手术组大鼠海马ＣＡｌ区锥体细胞排列规　则，无明显神经元变性、液化坏死及神经胶质细胞增　生（Ｆｉｇ．１Ｂ）；（２）模型组大鼠海马ＣＡＩ区锥体细胞　排列松散，部分胞核固缩、溶解或消失，可见点状液　化性坏死，有较多空泡形成，神经元数量减少，神经　胶质细胞少量增生，并且其与周围神经元的突触联　系减少（Ｆｉｇ．１Ｃ）；（３）ＧＴＰｓ治疗组大鼠海马ＣＡｌ区　锥体细胞数量、排列和形态均较模型组明显改善　（Ｆｉｇ．１Ｄ）。　４．大鼠海马ＣＡ１区超微结构的变化　４．１　ＢＢＢ超微结构的变化（１）假手术组毛细血　管内皮细胞的细胞核、线粒体等均清晰可见。毛细　血管腔内膜完整、连续、光滑，层次较清楚，电子密度　均匀（Ｆｉｇ．２－１）；（２）模型组毛细血管基底膜有破损，　表现为血管周围见大量红细胞渗出。内皮细胞胞质　内线粒体、粗面内质网等细胞器肿胀呈空泡状，胞内　吞饮小泡增加。周细胞细胞核见固缩（Ｆｉｇ．２－２）。　毛细血管内膜凹凸不平，可见大量微绒毛形成（Ｆｉｇ．　２－３）。星形胶质细胞发生水肿甚至坏死，其内线粒　体可见基质颗粒消失即空泡化现象、变形肿胀，胶质　膜与血管间隙变大（Ｆｉｇ．２－４）。部分标本毛细血管　腔内红细胞变形，并可见明显出血和水肿，说明　ＢＢＢ有明显破坏，通透性明显增加；（３）ＧＴＰｓ治疗　组毛细血管内皮细胞表现出吞饮小泡减少、表面微　绒毛样结构消失的现象，毛细血管基底膜轮廓清晰、　密度均匀，内皮细胞内线粒体病变明显减轻（Ｆｉｇ．２～　５）。星形胶质细胞略显水肿，但较对照组明显减轻　（Ｆｉｇ．２－６）。　４．２海马ＣＡ１区神经细胞超微结构的变化（１）　假手术组大鼠神经细胞胞质中线粒体、粗面内质网、　核糖体等细胞器丰富，细胞核形态规则，核膜完整光　滑，核内染色质分布均匀、电子密度低。突起中细胞　器轮廓清晰，微管、微丝排列有序（Ｆｉｇ．３－１）；（２）模　型组大鼠部分神经元细胞核尚完整，但核质模糊不　清，密度增高，胞质中线粒体出现嵴断裂、模糊或消　失呈空泡状，粗面内质网排列紊乱，并且扩张、断裂　成小棒状，脱颗粒（Ｆｉｇ．３－２）。部分神经元还可见核　碎裂，细胞核染色质崩解成小碎片，核膜破裂，核碎　片分散于胞浆内，形成凋亡小体。神经元髓鞘异常，　表现为形态不规则，有空泡出现，板层之间裂开，宽　窄不均，中间有电子密度高的嗜锇酸颗粒出现（Ｆｉｇ．　３—３）；（３）ＧＴＰｓ治疗组大鼠神经元细胞核结构完　整，核质清晰，细胞质中细胞器较模型组多，细胞器　肿胀相对较轻。神经元髓鞘形态较规则，未见明显　异常（Ｆｉｇ．３－４）。　讨　论　缺血性脑损伤是一个复杂的病理生理过程，发　病机制尚不清楚，对此有诸如细胞内钙超载、免疫炎　症损伤、氧自由基损伤等多种学说＿１。。，其中氧自由　基损伤学说占重要地位。在生物体内，脑组织含有　大量高浓度的不饱和脂肪酸，需要较多氧供，而其内　的自由基清除功能相对缺乏，故更易受氧化应激的　损伤。结扎切断双侧颈总动脉后，脑组织缺血、缺氧　和出血使神经元线粒体电子传递链发生脱偶联，产　生并释放大量的氧自由基，协同广泛浸润的炎症细　胞分泌的氧自由基ｕ　，迅速攻击生物膜的脂类、糖、　蛋白质和细胞内的核酸，引起脂质和糖发生过氧化　反应，蛋白质变性，ＤＮＡ多核苷酸主链断裂，碱基发　生修饰，从而使神经元损伤、死亡。因此，具有清除　自由基活性的药物可以选择作为改善和预防缺血性　脑损伤的潜在药物。　ＧＴＰｓ是从绿茶中提取的多酚类化合物，主要　成分为儿茶素类（黄烷醇类），其酚羟基是天然的供　氢体，在体内、体外均有很强的清除自由基、抗氧化　的功能。ＧＴＰｓ吸收后广泛分布于全身各器官并可　通过ＢＢＢＥ１２　１　３］。其清除自由基和抗氧化的功能主　要通过以下四个机制：（１）ＧＴＰｓ具有”儿茶酚”样结　构，螯合产生氧自由基所必须的铁离子Ｌ】　；（２）　ＧＴＰｓ捕获引起ＤＮＡ和其他细胞内分子损伤及脂　质过氧化反应的超氧阴离子自由基和羟自由基；（３）　第３期　詹周伟等．绿茶多酚对脑缺血大鼠血脑屏障及学习记忆功能的影响　２６５　黄烷醇类能与过氧自由基发生反应，从而终止脂质　过氧化链反应；（４）ＧＴＰｓ协同促进谷胱甘肽过氧化　物酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽一Ｓ一转移酶的活性口　。　基于此，ＧＴＰｓ已被广泛应用于帕金森氏病等神经　退行性疾病的基础和临床研究。本研究将ＧＴＰｓ用　于抗缺血性脑损伤的　验研究，期望从行为学和形　态学角度出发，寻找改善缺血性脑损伤的药物。　本研究采用永久性结扎切断双侧颈总动脉法建　立脑缺血动物模型，采取早期给予ＧＴＰｓ干预治疗　并连续用药１４ｄ，以期达到及时缓解脑组织的缺血　性损伤。ＢＢＢ作为血液与中枢神经系统的分界面，　由内皮细胞、周细胞、星形胶质细胞基底膜等构成，　是维持神经元微环境稳态的重要物质基础＿１　，其主　要结构是血管内皮细胞之间的紧密连接，其次内皮　细胞胞浆中吞饮小泡数目少也是其屏障的基础，而　管周间隙的大小、周围组织的水肿程度及星形胶质　细胞肿胀程度也能够反映ＢＢＢ的通透性。Ｍａｓａｋｉ　等［】　研究发现双侧颈总动脉结扎后３ｈ时ＢＢＢ即　开始破坏。在此过程中，脑缺血后生成的大量自由　基与ＢＢＢ的通透性改变密切相关口　，ＢＢＢ通透性　增高，血循环中的有害物质容易进入脑实质内，导致　血管源性脑水肿出血，加重继发性脑损伤，引起海马　微环境紊乱。而后者对ＢＢＢ通透性的增高又具有　促进作用。研究表明缺血性脑水肿的发生以及继发　的学习记忆功能障碍与ＢＢＢ有密切关系＿１　。我们　通过电镜下观察海马区的超微结构，发现脑缺血后　血管内皮细胞内吞饮小泡增加，星形胶质细胞发生　水肿甚至坏死，其内线粒体可见空泡化现象，胶质膜　与血管间隙增大。这与国外研究结果相一致。　ＣａｓｔｅｊｏｎＬ２。。认为，脑缺血后脑水肿的发生主要是由　于脑微血管内皮细胞中吞饮小泡转运增强。由星形　胶质细胞胞体发出的突起贴附于毛细血管壁形成胶　质膜，后者作为ＢＢＢ的重要组成部分之一¨２　，在脑　缺血后也发现有明显损伤。这些都为脑缺血后　ＢＢＢ的损伤提供了证据。　已有很多文献表明［２ｚ－２４３成年大鼠脑缺血后神经　元中存在坏死、凋亡。本研究发现在连续用药１４ｄ　后，模型组大鼠海马ＣＡ１区锥体细胞排列松散，部　分神经元凋亡、坏死，神经元数量减少，与周围神经　元的突触联系减少。电镜结果进一步证明了脑缺血　后海马区神经元存在异常：神经元内线粒体空泡化，　粗面内质网紊乱，胞核固缩，神经元髓鞘异常。说明　ＢＢＢ的损伤使海马微环境发生改变，引起脑神经细　胞功能、代谢与结构的改变，进而使海马区神经元功　能障碍。线粒体作为细胞的能量转化器，为细胞提　供能量，同时还是控制细胞凋亡、产生氧自由基的主　要细胞器。线粒体功能的失调已经被证明可导致多　种神经退行性疾病［２　，也参与了脑缺血后学习记忆　功能障碍的发生。髓鞘的作用是保护神经元并使神　经冲动在神经元上得到很快的传递，所以，髓鞘的异　常变化也会使神经冲动的传送受到影响。中枢传导　速度减慢，导致信息处理缓慢，也是学习记忆障碍的　重要原因Ｌ２　。Ｐｅｔｅｒ￣　对灵长类动物猕猴的研究以　及Ｓａｖｖａｋｉ［２８３等研究发现，髓鞘成分异常参与了认　知功能的降低。同时Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验结果也显　示模型组大鼠存在着与神经元损伤呈正相关的学习　记忆障碍。相比之下，给予ＧＴＰｓ脑缺血后引起的　ＢＢＢ病理改变明显减轻，比如胞饮小泡数目较少，　血管内皮细胞结构较完整等等，海马ＣＡｌ区锥体细　胞数量、排列和形态均较模型组明显改善，大鼠的学　习记忆能力也较模型组明显提高。　从大鼠学习记忆能力、海马ＣＡ１区神经细胞、　神经胶质细胞以及ＢＢＢ结构变化的结果提示：　ＧＴＰｓ能对抗氧化应激，保护ＢＢＢ，减轻脑组织缺血　性损伤，改善学习记忆能力。故此研究可为脑血管　疾病的临床治疗提供一种药物选择。同时，其用于　防治人类脑缺血导致的血管性痴呆以及用药的最佳　时间与最佳剂量以及ＧＴＰｓ的毒副作用和远期效果　都有待今后深人研究与探讨。　参　考　文　献　［１］Ｋａｗａｓｅ　Ｍ，Ｍｕｒａｋａｍｉ　Ｋ，Ｆｕｊｉｍｕｒａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘａｃｅｒｂａ—　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｅｌａｙｅｄ　ｃｅｌｌ　ｉｎｊ　ｕｒｙ　ａｆｔｅｒ　ｔｒａｎｓｉｅｎｔ　ｇｌｏｂａ１　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ｉｎ　ｍｕｔａｎｔ　ｍｉｃｅ　ｗｉｔｈ　ｃｕｚｎ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ　ｄｅｆｉｃｉｅｎ—　ｃｙ．Ｓｔｒｏｋｅ，１９９９，３０（９）：１９６２—１９６８　［２］Ｐｌｕｔａ　Ｒ．Ｉｓ　ｔｈｅ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ　ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ　ｆｏｒ　ｆｕｌｌ—ｂｌｏｗｎ　Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ　Ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ７．Ｎｅｕｒｏｌ　Ｒｅｓ，２００６，２８（６）：６６５—６７１　Ｅ３３　Ｃｏｔｒｉｎａ　ＭＬ，Ｋａｎｇ　Ｊ，Ｌｉｎ　ＪＨ，ｅｔ　ａ１．Ａｓｔｒｏｃｙｔｉｃ　ｇａｐ　ｊ　ｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｒｅｍａｉｎ　ｏｐｅｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｉｓｃｈｅｍｉｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，１９９８，１８（７）：２５２０－２５３７　Ｅ４］Ｌｉ　ｗＥ，Ｏｃｈａｌｓｋｉ　ＰＡ。Ｈｅｒｔｚｂｅｒｇ　ＥＬ．Ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｏｇｎｉ—　ｔｉｏｎ，ｕｈｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙ１ａｔｉｏｎ　ｓｔａｔｕｓ　ｏｆ　ａｓｔｒｏ—　ｃｙｔｉｅ　ｇａｐ　ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３　ｉｎ　ｒａｔ　ｂｒａｉｎ　ａｆｔｅｒ　ｃｅｒ—　ｅｂｒａ１　ｆｏｃａ１　ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，１９９８，１０（７）：２４４４—　２４６３　ｇ５］Ｐａｎｉｃｋａｒ　ＫＳ，Ｎｏｒｅｎｂｅｒｇ　ＭＤ．Ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓ—　ｃｈｅｍｉｃ　ｉｎｊ　ｕｒｙ：ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｃｏｎｓｉｄｅｒａ—　ｔｉｏｎｓ．Ｇｌｉａ，２００５，５０（４）：２８７—２９８　［６］ＯＵＮＪＡＩＪＥＡＮ　Ｓ，ＴＨＥＰＨＩＮＬＡＰ　Ｃ，ＫＨＡＮＳＵＷＡＮ　２６６　中国组织化学与细胞化学杂志　第２１卷　Ｕ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｇｒｅｅｎ　ｔｅａ　ｏｎ　ｉｒｏｎ　ｓｔａｔｕｓ　ａｎｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｉｒｏｎ—ｌｏａｄｅｄ　ｒａｔｓ．Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ，２００８，４（４）：３６５—　３７０　［７］Ｎａｎｒｉ　Ｍ，Ｗａｔａｎａｂｅ　Ｈ．Ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　２ＶＯ　ｒａｔｓ　ａｓ　ａ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｄｉｓｅａｓｅ．　Ｎｉｐｐｏｎ　Ｙａｋｕｒｉｇａｋｕ　Ｚａｓｓｈｉ，１９９９，１１３（２）：８５—９５　Ｅ８３　Ｍｏｒｒｉｓ　Ｒ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ａ　ｗａｔｅｒ－ｍａｚｅ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ　ｆｏｒ　ｓｔｕｄｙｉｎｇ　ｓｐａｔｉａｌ　ｌｅａｒｎｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，　１９８４，１１（１）：４７—６０　［９］Ｐｏｕｃｅｔ　Ｂ，Ｓａｖｅ　Ｅ，Ｌｅｎｃｋ－Ｓａｎｔｉｎｉ　ＰＰ．Ｓｅｎｓｏｒｙ　ａｎｄ　ｍｅｍ—　ｏｒｙ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ　ｐｌａｃｅ　ｃｅｌｌｓ．Ｒｅｖ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，　２０００，ｌ１（２－３）：９５－ｌ１１　［１Ｏ］Ｔｒａｙｓｔｍａｎ　ＲＪ，Ｋｉｒｓｃｈ　ＪＲ，Ｋｏｅｈｌｅｒ　ＲＣ．Ｏｘｙｇｅｎ　ｒａｄｉ—　ｃａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊ　ｕｒｙ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ａｎｄ　，ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．Ｊ　Ａｐｐｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９９１，７１（４）：１１８５—１１９５　［１１］Ｃｈａｎ　ＰＨ．Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｏｘｉｄａｎｔｓ　ｉｎ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｄａｍａｇｅ　［ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ，１９９６，２７（６）：１１２４—１１２９　［１２］Ｓｕｇａｎｕｍａ　Ｍ，Ｏｋａｂｅ　Ｓ，Ｏｎｉｙａｍａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．ｗｉｄｅ　ｄｉｓｔ　ｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ［３Ｈ］（一）一ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ　ｇａｌｌａｔｅ，ａ　ｃａｎｃｅｒ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　ｔｅａ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ，ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｔｉｓｓｕｅ．Ｃａｒｃｉｎｏ—　ｇｅｎｅｓｉｓ，１９９８，１９：１７７１～１７７６　［１３］Ｉｎａｎａｍｉ　Ｏ，Ｗａｔａｎａｂｅ　Ｙ，Ｓｙｕｔｏ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｏｒａｌ　ａｄｍｉｎ　ｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ（一）ｃａｔｅｃｈｉｎ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒ—　ｆｕｓｉｏｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｎｅｕｒｏｎａｌ　ｄｅａｔｈ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｒｂｉｌ．Ｆｒｅｅ　Ｒａｄｉ—　ｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９８，２９：３５９－３６６　［１４］Ｌｉ　Ｌ，ＩＡ　Ｙｗ，Ｚｈａｏ　ＪＹ，ｅｔ　ａ１．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｉｒｏｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ　１　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｒｔｅｘ　ａｎｄ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓ—　ｃｈｅｍｉａ．』Ｃｌｉｎ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００９，１６（１１）：１４６６—１４７２　［１５］Ｒａｍａｓｓａｍｙ　Ｃ．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ　ｄｉｓｅａｓｅｓ：ａ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｔａｒｇｅｔｓ．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００６，５４５（１）：　５１—６４　［１６］Ｃｏｐｉｎ　ｊＣ，Ｇａｓｃｈｅ　Ｙ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ．Ａｎｎ　Ｆｒ　Ａｎｅｓｔｈ　Ｒｅａｎｉｍ，２００３，　２２（３）：２０２—２１４　［１　７］Ｕｅｎｏ　Ｍ，Ａｋｉｇｕｃｈｉ　Ｉ，Ｈｏｓｏｋａｗａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ　ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ　ａｒｅａｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｏｒｍａｌ　ｍｏｕｓｅ　ｂｒａｉｎ．Ａｃｔａ　Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，２０００，９９（４）：　３８５～３９２　［１８３店代彬，李树清．树购脑缺血时海马微环境与血脑屏　障通透性改变的可能机制．中国微循环　２００８，１２（２）：　７６—８０　ｒ　１　９］Ｐｌｕｔｓ　Ｒ．Ｉｓ　ｔｈｅ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ　ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎ　ｃｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ　ｆｏｒ　ｆｕｌｌ——ｂｌｏｗｎ　Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ？Ｎｅｕ——　ｒｏｌ　Ｒｅｓ，２００６，２８（６）：６６５—７１　Ｅｇｏ］Ｃａｓｔｅｊ６ｎ　ＯＪ．Ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｗａｌｌ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｅｄｅｍａ．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ　Ｅｘｐ　Ｎｅｕｒｏｌ，１９８Ｏ，３９（３）：２９６　３２８　［２１］Ｋｕｃｈｌｅｒ　Ｂｏｐｐｓ，Ｄｅｌａｕｎｏｙ　ＪＰ，Ａｒｔａｕｈ　ＪＣ，ｅｔ　ａ１．Ａｓｔｒｏ—　ｃｙｔｅｓ　ｉｎｄｕｃｅ　ｓｅｖｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｉｎ　ｎｏｎ—ｎｅｕｒａｌ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ．Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ．１９９９，１０（６）：　１３４７—１３５３　［２２］Ｆｅｒｒｅｒ　Ｉ．Ｃｅｌｌ　ｄｅａｔｈ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｎｏｒｍａｌ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ｂｒａｉｎ，　ａｎｄ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｉｏｎｉｚｉｎｇ　ｒａｄｉａｔｉｏｎ，ｍｅｔｈｙｌ—ａｚｏｘｙｍｅｔｈａ—　ｎｏｌ　ａｃｃｔａｔｃ，ａｎｄ　ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｓｃｈｅｍｉａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ．Ｎｅｕｒｏｐａ　ｔｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９６，２２（０６）：４８９—　４９４　［２３］Ｌｉｎｎｉｋ　ＭＤ，Ｍｉｌｌｅｒ　ＪＡ，Ｃａｖａｌｌｏ　Ｊ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ＤＮＡ　ｆｒａｇ　ｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｃｅｒｅｂｒａＩ　ｃｏｒｔｅｘ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｐｅｒｍａｎｅｎｔ　ｍｉｄｄｌｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ａｒｔｅｒｙ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｒａｉｎ　ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９５，３２（１）：１１６—１２４　［２４］ＣｈｒｒｉａｕｔＭＣ，ＢｅｎＡＹ．Ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ：ｉｓ　ｃｅｌｌ　ｄｅａｔｈ　ａ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　ａｐｐｏｔｏｓｉｓ．Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｄｅ　Ｐｅｄｉａｔｒｉｅ，１９９６，３（１）：　２４５—２４７　［２５］Ｓｕ　Ｂ，Ｗａｎｇ　Ｘ，Ｚｈｅｎｇ　Ｉ　，ｅｔ　ａ１．Ａｂｎｏｒｍａｌ　ｍｉｔｏｃｈｏｎ—　ｄｒｉａ１　ｄｙｎａｍｉｃｓ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｊｖｅ　ｄｉｓｅａｓｅｓ．　Ｂｉｏ—　ｃｈｉｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ，２０１０，１８０２（１）：１３５　１４２　［２６］Ｗｅｎ　ＨＭ，Ｍｏｋ　ＶＣ，Ｆａｎ　ＹＨ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｗｈｉｔｅ　ｍａｔｔｅｒ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｎ　ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ　ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｌａｃｕｎａｒ　ｉｎｆａｒｃｔｓ．Ｓｔｒｏｋｅ，２００４，３５（８）：１８２６－ｌ８３０　［２７］Ｐｅｔｅｒｓ　Ａ，Ｓｅｔｈａｒｅｓ　Ｃ．Ａｇｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｙｅｌｉｎａｔｅｄ　ｆｉｂｅｒｓ　ｉｎ　ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ　ｃｏｒｔｅｘ　ａｎｄ　ｃｏｒｐｕｓ　ｃａｌｌｏｓｕｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｎ—　ｋｅｙ．Ｊ　Ｃｏｍｐ　Ｎｅｕｒｏｌ，２００２，４４２（３）：２７７—２９１　［２８２　Ｓａｖｖａｋｉ　Ｍ，Ｐａｎａｇｉｏｔａｒｏｐ０ｕｌｏｓ　Ｔ，Ｓｔａｍａｔａｋｉｓ　Ａ，ｅｔ　ａ１．　Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ　ｏｆ　ｌｅａｒｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｍｅｍｏｒｙ　ｉｎ　ＴＡＧ　１　ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｉｃｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｈｏｒｔｅｒ　ＣＮＳ　ｉｎｔｅｒｎｏｄｅｓ　ａｎｄ　ｄｉｓ　ｒｕｐｔｅｄ　ｊｕｘｔａｐａｒａｎｏｄｅｓ．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００８，３９　（３）：４７８—４９０　［２９２　Ｘｕ　Ｙ，Ｚｈａｎｇ　ＪＪ，Ｘｉｏｎｇ　Ｉ　，Ｚｈａｎｇ　Ｉ　，ｅｔ　ａ１．Ｇｒｅｅｎ　ｔｅａ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ　ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｈｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｖｉａ　ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ．Ｌｉｕ　Ｈ　Ｊ　Ｎｕｔｒ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１０，２ｌ（８）：７４ｌ一７４８　［３Ｏ］Ｚｈａｎｇ　Ｓ，Ｌｉｕ　Ｙ，Ｚｈａｏ　Ｚ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｇｒｅｅｎ　ｔｅａ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ｏｎ　ｃａｖｅｏｌｉｎ一１　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｎｅｕｒｏｌ　Ｒｅｓ，２０１０，３２（９）：　９６３　９７０　ｒ３ｉ］Ｓｈａｒｍａ　ＨＳ。Ｍｉｃｌｅｓｃｕ　Ａ，Ｗｉｋｌｕｎｄ　Ｉ　．Ｃａｒｄｉａｃ　ａｒｒｅｓｔ—　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｒｅｇｉｏｎａｌ　ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ　ｂｒｅａｋｄｏｗｎ，ｅｄｅｍａ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｒａｉｎ　ｐａｔｈｏｌｏｇｙ：ａ　ｌｉｇｈｔ　ａｎｄ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉ—　ｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ａ　ｎｅｗ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｐｒ０ｔｅｃｔｉ０ｎ　ｉｎ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｂｒａｉｎ．　Ｊ　Ｎｅｕｒａｌ　Ｔｒａｎｓｍ，２Ｏ¨，１１８（ｉ）：８７—１１４　Ｅ３２］Ｇｕ　Ｙ，Ｄｅｅ　ＣＭ，Ｓｈｅｎ　Ｊ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌｓ，　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏＤｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ　ａｎｄ　ｃａｖｅｏｌｉｎ　ｌ　ｉｍｐａｃｔｓ　ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ　ｂａｒｒｉｅｒ　ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ．Ｆｒｏｎｔ　Ｂｉｏｓｃｉ（Ｓｃｈｏｌ　第３期　詹周伟等．绿茶多酚对脑缺血大鼠血脑屏障及学习记忆功能的影响　２６７　Ｅｄ），２０１Ｉ，３：１２１６—１２３１　１－３３］Ｐａｒｋ　ＵＪ。Ｌｅｅ　ＹＡ。Ｗｏｎ　ＳＭ，ｅｔ　ａ１．Ｂｌｏｏｄ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｉｒｏｎ　ｍｅｄｉａｔｅｓ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｎａ１　ｄｅａｔｈ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ　ＣＡ１　ａｒｅａ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｔｒａｎｓｉｅｎｔ　ｆｏｒｅｂｒａｉｎ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ｉｎ　ｒａｔ．Ａｃｔａ　Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏ１，２０１１，１２１（４）：４５９—　４７３．　图　版说　明　图ｌ　示各组大鼠海马ｃＡ１区神经元形态结构。甲苯胺蓝　染色。图１—１：　示高倍镜下的放大区域。标尺一　１００ｕｒｎ。图１－２～４：　分别显示假手术组、模型组和　ＧＴＰｓ治疗组大鼠海马ＣＡ１区神经元形态结构。标　尺一５０ｕｍ。　图２　示各组大鼠海马ＣＡｌ区ＢＢＢ的形态结构。铅铀双染　色。图２－１：　海马假手术组大鼠海马ｃＡ１区毛细血　管，细胞核（☆）、线粒体（十）均正常。标尺一１．２５／￣ｍ。　图２—２：　模型组大鼠海马ＣＡ１区毛细血管，管周见　大量红细胞（△），内皮细胞内见大量转运小泡（一），　基底膜破损（　），周细胞胞核见固缩（☆）。标尺一２．　５　ｍ。图２—３：模型组大鼠海马ＣＡ１区毛细血管，内膜　形成大量微绒毛（　）。标尺一３．３／＊ｍ。图２—４：模型　组大鼠海马ＣＡ１区星形胶质细胞，星形胶质细胞发生　水肿、坏死（☆），其内线粒体出现空泡化（　）。标尺　一１．Ｏ　ｍ。图２—５：ＧＴＰｓ治疗组大鼠海马ＣＡ１区毛　细血管，内皮细胞无明显水肿，细胞器正常及细胞水　肿减轻（一）。标尺；２．Ｏ　ｍ。图２－６：ＧＴＰｓ治疗组大　鼠海马ＣＡ１区星形胶质细胞，无明显水肿，线粒体正　常（　）。铅铀双染色，标尺一１．Ｏ　ｍ．　图３　示各组大鼠海马ＣＡ１区神经元的形态结构。铅铀双　染色。图３—１：假手术组大鼠海马ＣＡ１区神经细胞，　细胞核（☆）、胞质中细胞器（　）均正常。标尺一２．　Ｏ　ｍ。图３—２：模型组大鼠海马ＣＡ１区神经细胞，细胞　核核质模糊不清（☆），线粒体出现嵴断裂、模糊或消　失呈空泡状（＋），粗面内质网排列紊乱、脱颗粒（一）。　标尺＝２．Ｏ　ｍ。图３—３：模型组大鼠海马ＣＡ１区神经　细胞髓鞘，形态不规则，有空泡出现（十），板层之间裂　开，宽窄不均，中间有电子密度高的嗜锇酸颗粒出现　（一）。标尺一２．５ｔｚｍ。图３—４：ＧＴＰｓ治疗组大鼠海马　ＣＡ１区神经细胞。标尺＝２．５／，ｍ。　ＥＸＰＬＡＮＡＴＩｏＮ　ｏＦ　ＦＩＧＵＲＥＳ　Ｆｉｇ．１　Ｓｈｏｗｉｎｇ　ｔｈｅ　ｎｅｕｒｏｎ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＣＡ１　ａｒｅａ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ　ｂｌｕｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ．　Ｆｉｇ．１　１：ｓｈｏｗｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｌａｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｌｏｗｕｐｓ．Ｂａｒ一　１００ｕｍ．Ｆｉｇ．１－２～４：ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｎｅｕｒｏｎ　ｍｏｒｐｈｏｌｏ—　ｇｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＣＡＩ　ａｒｅａ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｏｆ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ（Ｆｉｇ．１－２），ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｆｉｇ．１－３）ａｎｄ　ｔｒｅａｔ—　ｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ＧＴＰｓ（Ｆｉｇ．１－４）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　Ｂａｒ＝５０ｕｒｎ．　Ｆｉｇ．２　Ｓｈｏｗｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ＢＢＢ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ．　Ｓｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｌｅａｄ　ａｎｄ　ｕｒａｎｉｕｍ．Ｆｉｇ．２－１：Ｎｕｃｌｅｕｓ（☆）　ａｎｄ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉｏｎ（十）ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｉｎ　ＣＡ１　ｒｅ—　ｇｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｗｅｒｅ　ｂｏｔｈ　ｎｏｒｍａｌ　ｉｎ　ｓｈａｍ—．ｏｐｅｒａ—．　ｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ，Ｂａｒ：１．２５＞ｍ．Ｆｉｇ．２－２：Ｌａｒｇｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ｒｅｄ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌｓ（△）ｗｅｒｅ　ｓｅｅｎ　ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃａｐｉｌ—　ｌａｒｙ　ｉｎ　ＣＡ１　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｉｎ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｖｅｓｉｃｌｅ（—’）ｉｎ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａ１　ｃｅｌｌｓ．Ｂａｓｅｍｅｎｔ　ｍｅｍｂｒａｎｅ（　）ｗａｓ　ｄａｍ—　ａｇｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｕｓ　ｏｆ　ｐｅｒｉｃｙｔｅ（☆）ｗａｓ　ｃｏｎｔｒａｃｔｅｄ．　Ｂａｒ一２．５ｕｍ．Ｆｉｇ．２－３：Ｌａｒｇｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｖｉｌｌｕｓ　（　）ｗｅｒｅ　ｓｅｅｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｎｅｒ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｉｎ　ＣＡ１　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｉｎ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｂａｒ一　３．３“ｍ．Ｆｉｇ．２－４：Ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｅｄｅｍａ　ｈａｐｐｅｎｅｄ　ｉｎ　ａｓ—　ｔｒｏｃｙｔｅ　ｉｎ　ＣＡ１　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｏｆ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　（☆）ａｎｄ　ｖａｃｎｏｌａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｓｅｅｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ　０ｆ　ｔｈｏｓｅ　ｃｅｌｌｓ（　）．Ｂａｒ一１．０／＊ｍ。Ｆｉｇ．２－５：Ｅｄｅｍａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｉｎ　ＣＡ１　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｐ—　ｐｏｃａｍｐｕｓ　ｏｆ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ＧＴＰｓ　ｉｓ　ｎｏｔ　ｓｏ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ａｎｄ　ｏｒｇａｎｄｉｅｓ（　）ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙ　ｎｏｒｍａ１．Ｂａｒ一２．Ｏ“ｍ．　Ｆｉｇ．２－６：Ｅｄｅｍａ　ｉｎ　ａｓｔｒｏｃｙｔｅ　ｉｎ　ＣＡ１　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｉｎ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ＧＴＰｓ　ｉｓ　ｎｏｔ　ｓｏ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ　ｗｅｒｅ　ｎｏｒｍａ１．Ｂａｒ一１．０／，ｍ．　Ｆｉｇ．３　Ｓｈｏｗｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎ　ｉｎ　ＣＡ１　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｓｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｌｅａｄ　ａｎｄ　ｕｒａｎｉｕｍ．Ｆｉｇ．３－１：Ｎｕｃｌｅｕｓ（☆）ａｎｄ　ｏｒｇａｎｅｌｌｅｓ　（　）ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎ　ｉｎ　ＣＡ１　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｏｆ　ｓｈａｍ—ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｂｏｔｈ　ｎｏｒｍａｌ，Ｂａｒ＝２．Ｏ“ｍ．　Ｆｉｇ．３　２：Ｔｈｅ　ｎｕｅｌｅｏｐｌａｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｅｕｒｏｎ　ｉｎ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｂｌｕｒｒｉｎｇ（☆）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ　ｗｅｒｅ　ｓｗｏｌｌｅｎ，ｔｈｅ　ｃｒｉｓｔａｅ　ｗｅｒｅ　ｄｉｓｏｒｇａｎｉｚｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｈａｏｔｉｃ　ａｎｄ　ｄｉｌａｔｅｄ　ｒｏｕｇｈ　ｓｕｒｆａｃｅｄ　ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ　ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ　ａｎｄ　ｄｅ—．　ｃｒｅａｓｅｄ　ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ　ｇｒａｎｕｌｅｓ（　）．Ｂａｒ：２．Ｏ　ｕｒｎ。Ｆｉｇ．３—　３：Ｍｙｅｌｉｎ　ｓｈｅａｔｈｓ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎ　ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｉｒｒｅｇｕｌａｒ　ｗｉｔｈ　ｖａｃｕｏｌａｒ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｌａｍｉｎａｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｒｅａｄｔｈ　ｓｐｉｔｅｄ　ａｐａｒｔ　ｆｒｏｍ　ｅａｃｈ　ｏｔｈｅｒ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　ｄｅｎｓｅ　ｇｒａｎｕｌｅｓ　ａｐｐｅａｒｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅｍ（—　）．Ｂａｒ一２．５“ｍ．　Ｆｉｇ．３－４：Ｎｅｕｒｏｎ　ｉｎ　ＣＡ１　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｏｆ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｒｏｕｐ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ＧＴＰｓ．Ｂａｒ＝２．５“ｍ．