注射用盐酸伊立替康细菌内毒素检查方法的建立

西北药学杂志２０１０年６月　第２５卷第３期　２１１　挥发油提取器，提取挥发油至油量不再增加时停止加　该方法稳定、可行。　４讨论　热。放置１　ｈ后，读数。由于包合率、包合物产率对　实验结果都有显著的影响，故采用加权综合评分法进　行比较。对各指标的数据进行归一化，其中包合率、　包合物产率的权重系数根据重要性程度分别确定为　０．７和０．３。计算公式如下：　包合率＝包合物中实际含油量／挥发油的投入量×１。ｏ　包合物产率＝［包合物质量／（　环糊精投入量＋挥发油投入量）］×１０Ｏ　综合评分＝０．７ｘ包合率／最大包合率（７１．５》《）￣１ｏｏ＋ｏ．３ｘ包合物产率／最大包合物　中药制剂应用８－ＣＤ包合研究多用于挥发油，挥　发油被８一ＣＤ包合后，与外界环境隔离，可减少挥发　油在生产、贮存过程挥散或氧化变质，增加了药物的　稳定性；挥发油包合后，掩盖了药物的不良气味，减少　刺激性，降低毒性；可以改善药物的溶解性，提高生物　利用度；液体药物固体粉末化，便于制剂制备。Ｊ３一环　糊精包合挥发油一般常用饱和水溶液法，影响包合工　产率（９１．２￣）￣１００　３结果与分析　３．１　正交实验结果见表２。　表２丁香挥发油包合正交实验结果　Ａ　４．８８　Ｚ　Ｚ．４４　７．１Ｚ　Ｂ　３．５８　２　１．７９　５．２２　Ｃ　７７．５２　２　３８．７６　１１３．１９　＜０．０１　堡耋　：塑　：型　：　注：Ｒ．。５（２－ｚ）：１９，Ｆ　０ｌｏｌ（２，２）＝９９　由表２直观分析可知，包合时间９０　ｍｉｎ最优；包　合温度５Ｏ℃最优；挥发油与＆ＣＤ的配比以１：９最　优。由表３方差分析可知，挥发油与ｆ｝－ＣＤ的配比对　挥发油的包合具有非常显著性影响，综合考虑确定最　佳的工艺条件为Ａ。Ｂ。Ｃ。。　３．３验证实验为了验证所选工艺条件的可行性，　增加实验的可信度，按照以上确定的最佳工艺条件　Ａ。Ｂ。Ｃ。，即：包合时间９０　ｍｉｎ，包合温度５Ｏ℃，挥发　油与Ｂ—ＣＤ的配比１：９，进行了３个平行验证实验。　以包合率、包合物产率为指标进行评价，结果见表４。　表４验证实验结果　结果表明：３个验证实验，包合率和包合物产率　均高于正交表中其它实验，说明所选工艺条件较好，　艺的主要因素有投料比、包合温度、包合时间等［８］。　因此，在正交表设计中，选择投料比、包合温度、包合　时间为考察因素。在包合工艺中，包合率为主要指　标，其次是包合物产率。通过正交实验得到丁香挥发　油８一环糊精最佳包合工艺条件为投料比１：９，包合　时间９０　ｍｉｎ，包合温度５Ｏ℃。　参考文献：　Ｅ１３李锦绣．丁香现代药理研究进展ＥＪ３．实用中医药杂志，　２００２，１８（６）：５４．　Ｅ２３杨滋渊，李巧如，赵院莉，等．丁香挥发油的抗菌作用研　究［Ｊ］．西北药学杂志，２００７，２２（４）：１８１．　Ｅ３３李巧如，刘宗智，任健康，等．丁香提取物抗菌机理的探　讨ＥＪ３．西北药学杂志，２００１，１６（６）：２６１—２６２．　Ｅ４３臧亚茄．丁香及其有效成分药理作用的实验研究Ｕ３．承　德医学院学报，２００７，２４（１）：７１—７３．　［５］赵阳，张纯，郭澄，等．丁香油一Ｂ一环糊精包合物的理化性　质Ｕ３．第二军医大学学报，２０００，１１（２１）：１５—１６．　Ｅ６３谢秀琼．中药新制剂开发与应用［Ｍ］．２版．北京：人民卫　生出版社，２００５：２５８．　Ｅ７３丁立芬．数理统计方法ＥＭ３．上海：上海科学技术出版　社，１９８５：１６０．　Ｅ８３严枫，奉建芳．　ＣＤ包合物应用于中药制剂的研究进展　ＥＪ３．中药材，１９９６，１９（６）：３１６．　（收稿日期：２０１０—０１—１９）　注射用盐酸伊立替康细菌内毒素　检查方法的建立　张　静，李小强，史高尚（上海希迪制药有限公司，上海　２０１２０３）　摘要：目的建立注射用盐酸伊立替康细菌内毒素的检查方　法。方法　用ｐＨ缓冲液调节注射用盐酸伊立替康的ｐＨ值，　以排除干扰。结果　用碱性调节剂稀释剂Ⅱ对供试品进行适　当稀释，调节ｐＨ值至中性，可以排除细茵内毒素检查干扰因　素。结论可以用细菌内毒素法代替原质量标准中的家兔热　原测定法控制其热原。　关键词：注射用盐酸伊立替康；细菌内毒素；干扰实验　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－２４０７．２０１０．０３．０２７　中图分类号：Ｒ９２７　文献标志码：Ａ　文章编号：１００４—２４０７ｌ２０１０）０３—０２１１—０３　２１２　西北药学杂志２０１０年６月　第２５卷第３期　盐酸伊立替康是经过修饰的天然喜树碱的衍生　按１　ｈ计算。本品Ｋ－－５　ＥＵ・（ｋｇ・ｈ）＿。；临床单次最　物，是一种疗效确切、毒副作用较小的抗癌药物，是特　大用药量３５０　ｍｇ・ｍ－。，Ｌ—Ｋ／Ｍ＝５×６０／（３５０×　异性抑制ＤＮＡ拓扑异构酶Ｉ的抗肿瘤药，用于晚期　１．７）一０．５　ＥＵ－ｍｇ＿。，本品规格为４０　ｍｇ／瓶，即本品　大肠癌的治疗［１］。　的内毒素限值为Ｌ＝２０　ＥＵ・ｍＬ＿　。为保证ｌＩ缶床用药的　对热原物质的检查，中国药典２００５年版附录的　安全性，本品细菌内毒素控制标准拟定为１Ｏ　ＥＵ，瓶。　检测法方法有细菌内毒素检查法和家兔热原测定法，　２．３鲎试剂的灵敏度复核实验按照２００５年版中　两者比较前者具有方法简便快捷，并可定量测定等优　国药典附录要求对２个厂家鲎试剂进行灵敏度复核。　点，注射用盐酸伊立替康为国家药品标准收载的品　２个厂家鲎试剂标示灵敏度均为０．１２５　ＥＵ・ｍＬ～，　种，标准中对热原物质的检查使用家兔热原测定　实测灵敏度　ｃ分别为０．１２５和０．１２５　ＥＵ・ｍＬ＿。。　法［２］。笔者采用ｐＨ缓冲液（碱性）试剂调节注射用　ｃ均在０．５　～２．０　，说明２批鲎试剂灵敏度复核　盐酸伊立替康（以下称为供试品）至中性后进行细菌　合格，可用于干扰实验和注射用盐酸伊立替康细菌内　内毒素的检测，可有效的排除检测干扰，建立了合理　毒素检查，结果见表１。　可控的细菌内毒素的检查方法［３—３。　表１鲎试剂灵敏度复核实验　１仪器与试药　１．１仪器漩涡混合器（天津天大天发设备有限公　司）；细菌内毒素凝胶检测仪（天津天大天发设备有限　公司）；所用实验器具均由本实验室经２５０℃２　ｈ除　热原处理。　注：十表不阳性；～表不阴性。　１．２　试药　细菌内毒素检查用水（ＢＥＴ水，批号　２．４　注射用盐酸伊立替康干扰实验预实验　０８０８０６，规格５　ｍＬ，湛江博康海洋生物有限公司）；鲎试　２．４．１　实验方法根据市售鲎试剂灵敏度范围（Ｏ．０３　剂１（ＴＡＬ１，批号０８０３１３０，灵敏度０．１２５　ＥＵ・ｍＬ＿。，规　～Ｏ．５　ＥＵ・ｎ也叫），分别计算细菌内毒素检查对应的最　格０．１　ｍＬ，湛江博康海洋生物制品有限公司）；鲎试　大有效稀释倍数为ＭＶＤ－－－Ｃ・Ｌ／　。式中Ｃ为供试品溶　剂２（ＴＡＬ２，批号０８０６０１，灵敏度０．１２５　ＥＵ・ｍＬ＿。，　液的浓度。对应的稀释倍数为２０￣３２０倍，取供试品及　规格０．１　ｍＬ，湛江安度斯生物有限公司）；细菌内毒　２个厂家的鲎试剂（　—Ｏ．１２５　ＥＵ・ｍＬ　）进行供试品　素工作标准品（批号２００８－６，规格１００　ＥＵ，中国药品　干扰预实验。　生物制品检定所）；碱性调节剂稀释剂Ⅱ（批号　２．４．２预干扰实验溶液的配制　Ａ１：将供试品溶液　０８０７２４，湛江安度斯生物有限公司）；注射用盐酸伊立　用ＢＥＴ水稀释至１０，２Ｏ，４０，８０和１６０倍；Ａ２：取供　替康（批号０８１００１，０８１００２，０８１００３，规格４０　ｍｇ／瓶，　试品１　ｍＬ，加入碱性调节剂稀释剂Ⅱ１　ｍＬ，此时ｐＨ　上海希迪制药有限公司）。　值为５～６，然后用ＢＥＴ水稀释至１０，２Ｏ，４Ｏ，８０和　２实验方法　１６０倍，用ＢＥＴ水将细菌内毒素工作标准品溶解稀　２．１　样品信息注射用盐酸伊立替康是盐酸伊立替康　释成４　浓度溶液。Ａ１、Ａ２溶液与４　细菌内毒素标　与适量辅料配制的无菌冻干制剂，其溶液ｐＨ为３．Ｏ～　准溶液进行对倍稀释，使成含２　细菌内毒素标准溶　４．５。盐酸伊立替康在酸性条件下，溶解度、稳定性较　液的系列Ａ３、Ａ４阳性溶液，用ＢＥＴ水将鲎试剂分别　好，由于注射用盐酸伊立替康溶解后药液呈酸性，在细　进行溶解。结果见表２。　菌内毒素检查过程中可能会有干扰存在，为了使检验　表２注射用盐酸伊立替康干扰预实验结果　方法更可靠、简便。笔者用碱性试剂调节供试品的ｐＨ　值至中性，与未调节ｐＨ值的供试品进行对比实验。－　２．２　细茵内毒素限值确定　根据中国药典２００５年　版附录　及中国药品生物制品检定所下发的细菌内　毒素检查方法研究指导原则［７］，药品、生物制品的细　菌内毒素限值（Ｌ）按公式Ｌ—Ｋ／Ｍ确定，式中Ｌ为供　试品的细菌内毒素限值，以ＥＵ・ｍＬ＿。，ＥＬＩ・ｎａｇ　或　ＥＵ・Ｕ　（活性单位）表示；Ｋ为每公斤体质量每小时　最大可接受的内毒素剂量，以ＥＵ／（ｋｇ・ｈ）表示，静　脉注射剂Ｋ一５　ＥＵ・（ｋｇ・ｈ）～，人均体质量按６０　ｋｇ　注：＋表示阳性；一表示阴性．　计算，体表面积按１．７　ｍ２计算，注射时间若不足１　ｈ，　结果表明：未进行调节的供试品溶液及其各浓　西北药学杂志２０１０年６月　第２５卷第３期　２１３　度的稀释液对２个厂家的鲎试剂均有一定的干扰作　用。根据常用鲎试剂（　一０．１２５　ＥＵ），因此对注射　节剂稀释剂Ⅱ对样品进行了稀释中和后，可以排除干　扰。采用该方法对３批样品进行检测，结果符合拟定　用盐酸伊立替康进行８０倍稀释，加入碱性调节剂稀　释剂Ⅱ和未加入碱性调节剂稀释剂Ⅱ的样品进行正　标准。可替代原质量标准中的家兔热原测定法检查　本品的热原。　式干扰实验。　２．５　注射用盐酸伊立替康的干扰实验根据干扰预　参考文献：　［１］杨建坤，商亚贞，刘宏伟，等．盐酸伊立替康的药理特性及　临床应用［Ｊ］．河北职工医学院学报，２００７，２４（１）：６１—６４．　［２］ＷＳ１一（Ｘ－１６６）一２００５Ｚ，注射用盐酸伊立替康［Ｓ］．　［３］林郁，焦志铁，沈素琴．细菌内毒素检查方法综述［Ｊ］．时　实验结果，将每瓶注射用盐酸伊立替康用２　ｍＬ注射　用水溶解，即为供试品溶液，取供试品溶液１　ｍＬ，加　入碱性调节剂稀释剂Ⅱ１　ｍＬ（ｐＨ值为５～６），然后　稀释成４０倍液，待用。用ＢＥＴ水分别将细菌内毒素　工作标准品溶解并稀释成１．０（４　），０．５（７Ａ），０．２５（　）和　０．１２５　ＥＵ・ｍＬ矗１（０．５　），并与４Ｏ倍溶液进行等体　积混合，制备成０．５（２　），０．２５（　），０．１２５（０．５　）和　０．０６（Ｏ．２５　）ＥＵ・ｍＬ叫的８Ｏ倍稀释液，分别用２　个厂家的鲎试剂，进行干扰实验，结果见表３。　表３注射用盐酸伊立替康干扰实验结果　往：＋表币阳性；一表币阴性。　结果表明，Ｅｓ，Ｅｔ均在０．５．：【～２．Ｏ　范围内，且　８Ｏ倍稀释液的干扰实验测得的Ｅｔ值均在０．５Ｅｓ～　２Ｅｓ之间，说明注射用盐酸伊立替康经过碱性调节剂　稀释剂Ⅱ处理的稀释液对鲎试剂与细菌内毒素反应　无干扰。　２．６　注射用盐酸伊立替康细茵内毒素检查　选择　一０．１２５　ＥＵ・ｍＬ　的鲎试剂，供试品溶液采用１：１　比例用碱性调节剂稀释剂Ⅱ进行稀释后，按供试品最　大有效稀释倍数ＭＶＤ—Ｌ／Ａ一１０／０．１２５—８０倍，按　规范操作，结果３批供试品细菌内毒素限值均符合拟　定标准。结果见表４。　表４注射用盐酸伊立替康细菌内毒素检查结果　注：＋表示朋性；一表示阴性．　３结论　实验结果表明，用注射用盐酸伊立替康对２个厂　家的鲎试剂进行了干扰实验，由于注射用盐酸伊立替　康呈酸性，对实验结果有一定的干扰，而使用碱性调　珍国医国药，２００６，１７（８）：１５７５－１５７６．　［４］陈仙美．注射用盐酸吡硫醇细菌内毒素检查法的建立及　方法学研究［Ｊ］．淮海医药，２００７，２５（５）：４２３—４２５．　［５３宋英兰．替硝唑注射液细菌内毒素检查方法的研究［Ｊ］．　西北药学杂志，２００９，２４（３）：２０７－２０８．　［６３　中国药典２００５年版［Ｓ］．二部．２００５：附录ⅪＥ　８６—８７．　［７３　中国药品生物制品检定所．中国药品检验标准操作规范　［Ｍ］．５版．北京：中国医药科技出版社，２００５：６．　（收稿日期：２０１０－０１－０４）　淫羊藿总黄酮胶囊微生物限度检查　方法的验证　张莉敏，喻利坚，侯晓玲（酒泉市药品检验所，甘肃酒泉　７３５０００）　摘要：目的　建立淫羊藿总黄酮胶囊微生物限度检查方法，并　对方法进行验证。方法采用离心集茵薄膜过滤法。结果　淫羊藿总黄酮胶囊可用离・　集茵薄膜过滤法进行微生物限度　的细菌检查。结论确立了微生物限度检查方法，保证微生　物限度检查方法的有效性。　关键词：淫羊藿总黄酮胶囊；微生物限度检查；方法验证　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—２４０７．２０１０．０３．０２８　中图分类号：Ｒ９２７　文献标志码：Ａ　文章编号：１００４－２４０７（２０１０）０３－０２１３－０３　淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ　ｂｒｅｖｉｃｏｒｎｕｍ　Ｍａｘｉｍ．、箭叶淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ　ｓａｇｉｔｔａｔｕｍ（Ｓｉｅｂ．Ｅｔ　Ｚｕｃｃ．）Ｍａｘｉｍ．、柔毛淫羊藿　Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ　ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ　Ｍａｘｉｍ．、巫山淫羊藿　Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ　ｗｕｓｈａｎｅｎｓｅＴ．Ｓ．Ｙｉｎｇ或朝鲜淫羊藿　Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ　ｋｏｒｅａｎｕｍ　Ｎａｋａｉ的干燥地上部分，具有　补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效［１］。现代研究表明，其　具有抗骨质疏松、增强性功能、增加心脑血管血流量、　促进造血功能、增强免疫、抗衰老、抗炎、抗肿瘤等多　方面药理作用，黄酮类成分是其主要活性成分　］。在　进行微生物限度检查时发现其具有抑菌作用，笔者按　照中国药典２００５年版一部［３　和中国药品检验标准操　作规范［４］，建立了淫羊藿总黄酮胶囊微生物限度检查　方法，方法经验证有效可行。