病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀的可行性探讨

・　７５Ｏ・　检验医学与临床２０１５年３月第１２卷第６期　Ｌａｂ　Ｍｅｄ　ＣＩｉｎ，Ｍａｒｃｈ　２０ｌ５，ｇｏ１．１２，Ｎｏ．６　・论　著・　病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀的可行性探讨　刘金嫔，王　莉，刘海涛△，金　松，李福玲（湖北省荆门市红十字中心血站【摘要】　目的４４８０００）　探讨亚甲蓝光化学法（ＭＢ－Ｐ）病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀凝血因子的可行性。方法　选取２０１４年１～６月无偿献血者捐献的４００　ｍＬ全血９３袋，分离新鲜冰冻血浆２００　ｍＩ　后再均分为２袋，各　１【）。ｍＬ，分别作为对照组和试验组。对照组直接制备冷沉淀凝血因子，试验组经ＭＢ－Ｐ法病毒灭活后再制备冷沉　淀凝血因子。检测每袋冷沉淀凝血因子中ＦⅧ和Ｆｂｇ水平。结果　对照组ＦⅧ和Ｆｂｇ水平分别为（８２．９士７．１）　ＩＵ／１Ｏ０　ｍＬ、（１０２．４±８．５）ｒａｇ／ＩＯ０　ｍｌ　，试验组分别为（５６．６±５．３）ＩＵ／１Ｏ０　ｍｌ一（８３．３±５．６）ｍｇ／１Ｏ０　ｍｌ　，试验组ＦⅧ　和Ｆｂｇ水平均低于对照组，组间比较差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），且均符合相关国家标准。结论　加强血液采　集、储存、运输和制备过程中的质量控制，使用经ＭＢ－Ｐ法病毒灭活新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀凝血因子符合相关　国家标准。　【关键词】冷沉淀；　病毒灭活；　冰冻血浆　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１５．０６．０１２　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７２　９４５５（２０１　５）０６—０７５０—０２　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｃｒｙ０ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｖｉｒａｌ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｆｒｅｓｈ　ｆｒｏｚｅｎ　ｐｌａｓｍａ　Ｌ　Ｕ　Ｊｉｎ—ｐｉｎ，ＷＡＮＧ　Ｌｉ，　ＬＪＵ　Ｈａｉ—ｔａｏ　。ＪＩＮ　Ｓｏｎｇ，ＬＪ　Ｆｕ—ｌｉｎｇ（Ｊｉｎｇｍｅｎ　Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ　Ｒｅｄ　Ｃｒｏｓｓ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｊｉｎｇｍｅｎ，Ｈｕｂｅｉ　４４８０００，（　＾　—　ｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｖｉｒａｌ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｆｒｅｓｈ　ｆｒｏｚｅｎ　ｐｌａｓｍａ　ｆｏｒ　ｐｒｅｐａｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｒｙｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ　ｃｌｏｔｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｂｌｕｅ　ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ（ＭＢ－Ｐ）ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　９　３　ｂａｇｓ　ｏｆ　ｗｈｏｌｅ　ｂｌｏｏｄ　４００　ｍＬ　ｄｏｎａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｖｏｌｕｎｔａｒｙ　ｂｌｏｏｄ　ｄｏｎｏｒｓ　ｆｒｏｍ　Ｊａｎ．ｔｏ　Ｊｕｎ．２ｏ　１　４　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ．Ｆｒｅｓｈ　ｆｒｏ—　ｚｅｎ　ｐｌａｓｍａ　２００　ｍＩ　ｗａｓ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｗｈｏｌｅ　ｂｌｏｏｄ　ａｎｄ　ｗａｓ　ｅｑｕａｌｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　２　ｂａｇｓ（１　００　ｍＩ　ｅａｃｈ）ａｓ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｆｔｅｒ　ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｒｅｓｈ　ｆｒｏｚｅｎ　ｐｌａｓｍａ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｔｈｅ　ｃｒｙｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ　ｃｌｏｔｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｔｈｅ　ｃｒｙｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ　ｃｌｏｔｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｖｉｒａ１　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｔｈｅ　ＭＢ－Ｐ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｒｙｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ　ｃｌｏｔｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ＦⅧａｎｄ　Ｆｂｇ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｂａｇ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ＦⅧａｎｄ　Ｆｂｇ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏ１　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ（８２．９土７．１）ＩＵ　１　００　ｍＩ　ａｎｄ　（１０２．４±８．５）ｍｇ／１００　ｍＩ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ（５６．６±５．３）ｉｕ／１００　ｍＩ　ａｎｄ（８３．３土　５．６）ｍｇ／１００　ｍＩ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅ　ＦⅧａｎｄ　Ｆｂｇ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎ　ｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５），ｂｕｔ　ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｃｏｎｆｏｒｍｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｎａｔｉｏｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｒｏｕｇｈ　ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｃｏｌｌｅｃ—　ｔｉｏｎ，ｓｔｏｒａｇｅ，ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｐｒｅｐａｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｒｙｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ　ｃｌｏｔｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖｉｒａｌ　ｉｎａｃｔｉｖａ　ｔｉｏｎ　ｆｒｅｓｈ　ｆｒｏｚｅｎ　ｐｌａｓｍａ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ＭＢ—Ｐ　ｍｅｔｈｏｄ　ｃｏｕｌｄ　ｍｅｅｔ　ｔｈｅ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｎａｔｉｏｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄｓ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　ｃｒｙｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ；　ｖｉｒａｌ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ；　ｆｒｏｚｅｎ　ｐｌａｓｍａ　输血是临床治疗疾病的一种有效手段，在现代医学中有着　不可替代的地位。但由于血液检测存在“窗口期”等问题，通过　的主要成分，即Ｆｂｇ和ＦⅧ水平进行ｒ检测，分析通过病毒灭　活ＦＦＰ制备冷沉淀凝血因子的可行性，以提高临床输ｍ的安　全性，现将结果报道如下。　１材料与方法　输血传播病毒的风险依然存在。血液主要由红细胞、白细胞、　血小板和血浆等组成，各种成分对病毒传播的危险性不同，其　中白细胞对病毒的传播风险最大，血浆其次。亚甲基蓝光化学　法（ＭＩ｝Ｐ）作为目前唯一获准用于临床的光化学血浆病毒灭活　１．１标本来源所有标本均为本血站２０１４年１～６　无偿献　血者捐献的４００　ｍＩ　全血，每批次选取小超过５袋，共９３袋。　１．２仪器与试剂　主要仪器设备：ＣＲ－７大容量离心机（日本　乍ｊ立公司），ＺＢＫ—ＹＢＭ０２医用病毒灭活柜（山东［１Ｉ保康），ＰＨ　技术｜】］，已应用于我国大部分血站。冷沉淀凝血因子是从新鲜　冰冻血浆（ＦＦＰ）中提取的冷不溶性沉淀物，因富含凝血因子Ⅷ　（ＦⅧ）、纤维蛋白原（Ｆｂｇ）等，被广泛用于治疗儿童及成人轻型　甲型血友病、血管性血友病（ｖＷＤ）、纤维蛋白原缺乏症及Ⅷ因　子缺乏症。ＧＢ　１８４６９－２０１２《全血及成分血质量要求》分别明确　Ｉｃ型恒温循环解冻箱（潍坊普华），ＣＡ一５０自动ｍ凝仪（日本希　森美康公司），ＳＴＡ—Ｒ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ全自动血凝分析仪（法国Ｓｔａ—　ｇｏ公司），Ｃｏｍｐｏｄｏｃｋ尢菌接管机（德国费森尤斯公司）；　了病毒灭活ＦＦＰ和冷沉淀凝血因子的国家标准，但并未明确　病毒灭活ＦＦＰ制备冷沉淀凝血因子的国家标准。为探讨采用　病毒灭活ＦＦＰ制备的冷沉淀凝血因子是否符合国家标准，作　者在２０１４年１～６月分别对不同方法制备的冷沉淀凝血因子　ＭＢＦ２１速冻机等（德国Ｄｏｍｅｔｉｃ公司）。耗材与试剂：Ｑ－４００血　袋及枸橼酸一磷酸盐一葡萄糖一腺嘌呤（ＣＰＤＡ　１）保存液（上海输　血技术有限公司和山东威高），一『欠性使用病毒火活过滤性器　材（上海输血技术有限公司和山东中保康），ＦⅧ、Ｆｂｇ试剂盒　＊　基金项目：湖北省荆门市科技计划项目（２０１３ＹＤ４８）。　作者简介：刘金嫔，女，本科，主管护师，主要从事血液采集和成分制备工作。　通讯作者，Ｅ　ｍａｉｌ：４３７３４２２８１＠ｑｑ．ｃｏｉｎ。　检验医学与临床２０１５年３月第１２卷第６期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｍａｒｃｈ　２０１５，Ｖｏ１．１２，Ｎｏ．６　・７５１・　（法国Ｓｔａｇｏ公司）。全部设备均在校准有效期内，全部试剂和　耗材均在有效期内使用。　１．３方法　关，还与凝血因子受温度和时间的影响有关＿７　８＿。此外，病毒灭　活后在吸附、过滤亚甲蓝的过程中，会吸附一部分ＦⅧ、Ｆｂｇ使　其水平下降。　。　１．３．１标本制备　所有标本采集后保存于ＣＰＤＡ一１保存液　中，置于２～６℃储血冰箱，８　ｈ内分离出血浆２００　ｍＬ，再平均　分为２袋，各１００　ｍＬ，分别作为对照组和试验组。对照组ＦＦＰ　放人一５Ｏ℃速冻机速冻成块备用。试验组血浆在３０　０００～　３８　０００　Ｌｕｘ、温度４℃、摆动条件下照射３５　ｒａｉｎ后，将病毒灭活　结合本次试验，作者认为：（１）应加强血液采集、储存、运输　过程中的质量控制。在血液采集过程中，严格执行《血站技术　操作规程》的相关规定，保证采血过程顺利，血液流速正常。若　２００　ｍＬ血液的采集时间超过７　ｍｉｎ，４００　ｍＬ血液的采集时间　超过１３　ｍｉｎ，不得用于制备ＦＦＰ。血液采集后应及时储存于　ＦＦＰ放入一５Ｏ℃速冻机速冻成块备用。完成ＦＦＰ制备、病毒　灭活操作后，将对照组和试验组ＦＦＰ置于水浴式血浆融化箱，　待融化至剩少量冰渣时，以离心法提取冷沉淀凝血因子以备检　２４６℃储血冰箱并保证运输过程的冷链保护，防止因温度影　响导致ＦⅧ、Ｆｂｇ水平下降。（２）采血后８　ｈ内必须完成ＦＦＰ　的制备、病毒灭活和速冻工作，冷沉淀凝血因子需在冷链条件　下以尽可能短的时间通过离心法完成收集和速冻工作，防止因　时间延迟导致的ＦⅧ、Ｆｂｇ水平下降。（３）临床使用时，采用专　用血浆融化机以３７℃水浴融化，取血后尽快输注。并以患者　测。所有操作严格按照国家相关标准操作规程执行。　１．３．２检测方法将每次制备的对照组、试验组冷沉淀凝血　因子（每次检测不超过１０袋）分别留取５　ｍＬ，使用自动血凝分　析仪检测ＦⅧ与Ｆｂｇ水平。严格按仪器标准操作规程和试剂　使用说明书操作。　１．４统计学处理采用ＳＰＳＳ１７．０统计学软件进行数据处理　与统计学分析，计量资料以ｉ＿－４－ｓ表示，组间比较采用ｔ检验；　以　一０．０５为检验水准，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　２结　果　能承受的最大速度输注。此外，根据ＦⅧ半衰期为８～１２　ｈ的　特性，连续输注等方法均是保证冷沉淀凝血因子的临床治疗效　果的重要保证。　综上所述，采用病毒灭活ＦＦＰ制备冷沉淀凝血因子，其　ＦⅧ、Ｆｂｇ水平均下降，但仍然符合国家相关标准。在血液的采　集、制备、输注等环节，严格执行国家相关规定和技术规程，不　会影响临床输注效果，且可以降低病毒感染风险。　参考文献　试验组ＦⅧ与Ｆｂｇ水平均低于对照组，组间比较差异均有　统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），且均符合ＧＢ　１８４６９—２０１２（（全血及成分　血质量要求》相关标准。见表１。　表１　两组冷沉淀凝血因子Ｆ１１与Ｆｂｇ检测水平比较（ｙ－－＿ｓ）＋　Ｅｌｉ杨建，朱琳，赵淑红，等．病毒灭活血浆的临床应用状况调　查［Ｊ］．临床输血与检验，２０１０，１２（３）：２６５—２６６．　［２］蔡杰，胡俊妍，陈映娥，等．白细胞滤器对新鲜冰冻血浆凝　血因子及血浆蛋白的影响［Ｊ］．中国热带医学杂志，２００６，　６（１）：１２３—１２４．　［３］陆萍，凌冰，季育华，等．亚甲蓝光化学法灭活血制品中巨　细胞病毒的研究［Ｊ］．中国输血杂志，２００５，１８（４）：２９０—　注：每袋１００　ｍＬ即相当于国标中来源于２００　ｍＬ全血。　３讨　论　２９２．　［４］王飞，卢舜华，叶小演，等．血浆病毒灭活后质星回顾性分　析［Ｊ］．重庆医学，２０１０，３９（１５）：２０４３—２０４４．　Ｅ５］黄文杰，范恩勇，孙海英．亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆　对凝血因子的影响［Ｊ］．实用医学杂志，２００６，２２（１８）：　２１９３—２１９４．　ＭＢ－Ｐ血浆病毒灭活法是通过向血浆中添加ＭＢ，使ＭＢ　与病毒基因核酸及脂质包膜相结合，在光照下诱导发生氧化损　伤而使病毒灭活；最后通过吸附过滤器内设置的纤维过滤膜层　和活性炭吸附层的阻滞作用、表面张力、电荷排斥力滤除　ＭＢ［　。［６］汤龙梅，杨春晖，周群刚，等．亚甲蓝病毒灭活血浆１年保　ＭＢ－Ｐ血浆病毒灭活是一种安全、有效，并适合临床用　存期质量调查研究［Ｊ］．检验医学与临床，２０１２，９（２４）：　３０４３—３０４４．　于单袋血浆灭活病毒的方法，其病毒灭活效果已得到大量实验　证实　。　［７］李静旗，马丽华，管尚峰．冷沉淀的质量分析［Ｊ］．大连大　学学报，２００４，２５（２）：１０２－１０３．　输注病毒灭活血浆相关制剂可降低输血传播疾病的发生　率，但是任何病毒灭活技术都可能对血液制剂中的有效成分产　［８］于建华，孙庶丽，王明静，等．病毒灭活血浆中有效成分及　亚甲蓝残留量的研究［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２０１０，２０　（６）：１５４１—１５４２．　生损伤。本研究结果显示，采用经ＭＢ－Ｐ进行血浆病毒灭活后　的ＦＦＰ所制备的冷沉淀凝血因子，其ＦⅧ、Ｆｂｇ水平均较采用　未灭活的ＦＦＰ所制备的冷沉淀凝血因子降低（Ｐ＜Ｏ．０５），与国　内相关文献报道一致［４－６３。但均符合相关血液制剂的国家标　准，即ＦⅧ≥４０　ＩＵ（来源于２００　ｍＬ全血），Ｆｂｇ≥７５　ｒａｇ（来源于　（收稿日期：２０１４—０９一Ｏ４　修回日期：２０１４一Ｉ２－２５）　２００　ｍＬ全血）。ＦⅧ、Ｆｂｇ水平下降的原因除与ＭＢ－Ｐ方法相　（上接第７４９页）　Ｓａｎｅｈｅｚ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｅｐｉｓｏｄｅｓ　ｏｆ　ｏｖｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｓｉｘ　ｍｏｎｔｈｓ　ｉｎ　ｃｈｉｌｄｒｅｎ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ　ｈｙｐｏｔｈｙｒｏｉｄ—　ｉｓｍ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｗｉｔｈ　ｓｕｓｔａｉｎｅｄ　ａｔｔｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　［１８］Ｌ６ｇｅｒ　Ｊ，Ｏｌｉｖｉｅｒｉ　Ａ，Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　ｓｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓｏｎ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ａｎｄ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ　ｈｙｐｏ—　ｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ［－Ｊ］：Ｈｏｒｍ　Ｒｅｓ　Ｐａｅｄｉａｔｒ，２０１４，８１（２）：８０—１０３．　（收稿日期：２０１４—０８—２２　修回日期：２０１４—１０—２４）　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｔ　ｓｃｈｏｏｌ　ａｇｅ［Ｊ］．Ｈｏｒｍ　Ｒｅｓ　Ｐａｅｄｉａｔｒ，　２０１０，７４（２）：１Ｉ４—１２Ｏ．