bDNA

中国卫生｛生验杂志２ｏｒ１２年２月苹Ｉ２卷第１期０　ｅｂ皿　Ｈｅａｌｔｈ　Ｌ山劬　ｌｌｒ　２０ｒ１２　【实验室技术探讨】　［文章编号］１００４－－８６８５（２Ｏ０２）０Ｉ—００　９—Ｏ１　ｂＤＮＡ技术在ＨＩＶ感染早期诊断中的应用　施文钧，高凯，熊远，徐慧芳，张周斌，陈小平　（广州市卫生防疫站，广东５１０￣０）　［中图分类号］Ｒ４４６　６２　［文献标识码］Ａ　ＨＩＶ抗体检测是ＨＩＶ感染病原学检测最常用的方法，但血　清ＨＩＶ抗体的出现一般发生于病毒急性感染后的第８ｄ到到　１Ｏ周，在抗体未产生之前的这个时期称为感染后的　窗口　期　【　，此期用Ｈ］Ｖ抗体检测的方法一般不能作出诊断。另　外，出生后１８个月内的婴儿有来自ＨＩＶ阳性母亲的抗Ⅲｖ—　ｃ抗体，若用抗体检测方法检测出婴儿ＨＩＶ抗体阳性，也不　能判断婴儿是否感染｝Ⅱｖ　我们在实际工作中遇到这类情况，　用分支ＤＮＡ（ｂｎＮＡ）拄术直接检测ＨＩＶ病毒载量解决丁这类早　期诊断的问题　１材料和方法　１．１对象例１：男．２８岁，吸毒』、员　例２：新生儿，出生后第　一天及一个月分别采血　母亲，２３　．生产后怀耻Ⅷｖ感染．　经酶联免疫吸附试验（ⅡＪ弘）初筛及蛋白印迹试验（ｗＢ）确认．　证实｝Ⅱｖ阳性　１．２方法初筛：抗｝Ⅱｖ—Ｉ／２ＥＬＩＳＡ试验（北京万泰生物技术　公司产品）；抗Ⅲｖ一１　ＰＡ（明胶颗粒凝集试验）（１３本富ｉ公司　产品）；复检：抗Ｉ－ｌ￣＂一１（包括Ｏ亚型）／２　ＥＬＩＳＡ试验（荷兰阿克　苏公司产品）；确认：抗Ｈ］Ｖ一１／２　ＷＢ试验（新加坡　ｎｄａｂ公　司产品）；ＨＩＶ病毒载量测定：ｂＤＮＡ试验（（￣ａｎｔｉｐｌｅｘ　ＩｔｌＶ一１　ｌｔＮＡ　３．０分析试剂，ｂＤＮＡ仪，美国Ｂａｙｅｒ—Ｃｈ／ｌ￣公司产品）　检测范围：５０—５００，０００拷贝／ｍｌ　ＨⅣ一ｌｔＮＡ．低于５Ｏ拷贝／ｍｌ　为阴性。　所有试验均按试剂说明书操作。　２结果　２　ｌ例１患者初筛ＥＬＩＳＡ阴性．ＰＡ非致敏颗粒和致敏颗粒　（包被纯化的灭活Ｈ１Ｖ抗原）反应均为阳性。经吸附试验后，　非致敏颗粒反应为阴性，致敏颗粒匣应阳性，但经复检ＥＨＳＡ　检测．则为阴性．未做确认试验　采用ｂＤＮＡ技术测得ＩｔｌＶ病　毒载揖为４４４４５３拷贝／ｍｌＨＩＶ—ＲＮＡ，证实｝Ⅱｖ阳性．且为急性　感染期患者。　２．２倒２新生儿出生后第一天血浆初筛ＥＬ１ＳＡ和ＰＡ均为阳　性．复检ＥＬＩＳＡ阳性　确认试验出现如下条带：ｇ￣６ｏ、ｇｐｌ２０、ｐ６６、　ｐ５５、ｐ５１、　１、ｐ３９（￣）、ｐ３１、ｐ２４、ｐ１７，带形与母亲的完全相同。　采用ｂＤＮＡ技术检测出生后一个月血浆中ＨＩＶ病毒载量：新生　儿＜５０拷贝／ｍｌＩ－ｌ￣＂一ｔｌＮＡ，其母亲为７５１７拷贝／ｍｌｔｔｌＶ—　ｔｌＮＡ，证实新生儿为Ｈｐ，ｒ阴性。　３讨论　｝Ⅱｖ感染的及时诊断对于控制传播和扩散是十分重要的。　使用一般的ＨＩＶ抗体筛选方法．患者在窗口期会出现捕检　目前使用具有高敏感性的第三代双抗原夹心法试剂，不仅可　检测抗Ⅲｖ—ｌ　，而且可检测早期出现的ｌ　抗体，使窗口期　町缩短至３—４周，但是仍然不能满足早期诊断的需要。　本研究中的两倒患者用Ⅲｖ抗体检剽，不能诊断是否ｔｔＩ￣＂　感染。用ｂＤＮＡ技术检测后，诊断出例１患者是早期感染，新　生儿则为阴性。说明ｂｎＮＡ技术可用于早期诊断　目前应用　的早期诊断方法有Ｐ２４抗原检测、病毒培养及病毒核酸测定。　１９９５年，美国ＦＤＡ推荐将Ｐ２４抗原检测作为血液、血液成分、　自细胞和血浆等筛查的常规方法ｉ２］。Ｐ２４抗原检测较病毒培　养及检测病毒核酸便宜，但Ｐ２４抗原检测法敏感性低。曾有报　道对Ｉ８个月婴儿的ＨＩＶ阳性标本直接检测Ｐ２４抗原，敏感性　仅为３４．２％，用低ＰＨ值法和加热法解离Ｐ２４抗原抗体复台物　后检测，敏感性分别为８５　４％和８７　８％　ｊ。病毒培养对实验　条件和技术要求比较高　病毒核酸测定是直接检测血浆中病　毒核酸的方法，其中ｂＤＮＡ技术是一种不依赖ＰＣＩ１的核酸放大　定　方法　其基本模式是杂交法，通过ｂＤＮＡ扩增与各靶探针　结台，使每个棱酸信号放大数百倍，信号强弱与ＤＮＡ量成正　比　ｂＤＮＡ技术试剂较为昂贵．但在早期诊断中仍有其应用优　点：①敏感性高，可以检测到血浆中最少５Ｏ拷贝／ｍｌ　ＨＩＶ—　Ｉ｛、＾：②可测病毒载量，有助于追踪ＨＩＶ感染的自然史以及预　测ｔｔｌＶ感染的疾病进程；③ｂＤＮＡ技术稳定性和重复性高，它　不需扩增病毒棱酸，克服了ＰＣＲ法中扩增物的交叉污染问题；　④ｂＤＮＡ可检测变异株，数十个覆盖整个病毒基因组的探针对　某些变异株的检测较为方便，即使与该段配对的探针没有杂　交上，其它区段的探针仍可以反应【　，；⑤对实验条件要求不　高，普通实验室可以开展ｂＤＮＡ拄术。　参考文献　：１］Ｈ０．ＤＤ，ｓ　咿ｄｈ蝴ｎ　ＭＧｌｔｅ￣ｎｉｅｋ　Ｌ，ｄ　Ｐｒｌｒ￣３＇ｈｕＴＴ哪Ｔ１　・　ｐｈｃｌ￣Ｊｐｉｅ　ｖｉｒｕｓｔｙｐｅ　１［１　ｉｎｆｅｅｌｉａ＇ｌ　ＡｎｎＩｎｔｅｒｎＭ　１９８５．１∞：ＳＮＩ一３．　［２］　ｃＤｃ　ｕ　ｓ　Ｐｅｂｌｉｃ　出　口　ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ　ｈ　ｔ￣ｉｎｇ帅ｄ　ｅｏｍｕ￣ｌｉｎｇ　ｂｌｏｏｄ　ａＴｄ　龋ｒ『１ａ　ｄｌ舶０　ｆｒ，ｒ　ｈ￣ａ，１　ｉｎｍ￣ｖｅ　ｄ　ｃｉ　叮　ｎ　ｔｙｐｅ　１　ｉ一　．Ｍ　１９９６；４５（ＲＲ一２）：１—９　［３：Ｐａｎ扫ｋｌ　ｌⅧｎ　Ｓ，Ｙ０ｓｌＬｌｈ哪Ｎ，｝　ｈｉＴ　０　，　ｙ函　８　ｏｆ　ｖｅｒｔｉｅ￣ｄ　Ｈ１Ｖ　ｉｎｆｅｃｔｉ￣ｉｎ　ｉｎｆｍｔ￣ｂｙ　ｒａｐｉｄ　ｄｅｌｅｅｌｉａａ【　ｉｎｍａｔｅ　ｃｏｒｒｍｌ　一　ｄｉ￣ｉａｔｅｄ　ＨＩＶ　．ＡＩＤｓ　Ｐａｌｉｅ￣ｔ　ｃ　Ｄｓ　１９９７；１１（６）：４２９　—４３３　４］　兴权、范江主编．艾东北病毒感染与艾撤病［Ｍ］．北京：人民卫　生　腼社，１９９９：２８９．　（收穑日期：２００１—１２—０８）